Copyright
©The Author(s) 2011. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2011-08-18; 19(23): 2455-2460
Published online 2011-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i23.2455
Published online 2011-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i23.2455
肝细胞癌中一种高通量二维细胞识别技术方法的建立
朱玉珍, 陈锡美, 上海市同济大学附属同济医院消化内科 上海市 200065
符达, 刘黎黎, 马雨水, 沈锡中, 复旦大学附属中山医院消化科 上海市 200032
朱玉珍, 硕士生, 主要研究肝癌发生的分子机制.
基金项目: 中国博士后基金面上项目, No. 20100480542
作者贡献分布: 朱玉珍与符达对此文所作贡献均等; 本文研究课题由沈锡中和陈锡美构思, 符达设计; 免疫荧光实验由刘黎黎完成; 细胞识别技术方法由刘黎黎与朱玉珍共同完成; 论文撰写由朱玉珍和马雨水完成, 修改由符达和沈锡中完成.
通讯作者: 陈锡美, 教授, 200065, 上海市新村路389号, 同济大学附属同济医院消化内科. chenxm021@126.com
电话: 021-56051080
收稿日期: 2011-05-30
修回日期: 2011-08-10
接受日期: 2011-08-17
在线出版日期: 2011-08-18
修回日期: 2011-08-10
接受日期: 2011-08-17
在线出版日期: 2011-08-18
Abstract
目的: 建立一种新颖的高通量二维细胞识别、定位技术, 为肝癌干细胞的鉴定、异质性分化细胞分类等提供技术平台.
方法: 收集原发性肝细胞癌患者手术标本1例, 每个标本分别石蜡包埋, 以1 μm的厚度连续切5片. 每张切片取第一片做常规HE染色, 病理诊断. 其余4张切片分别以肝癌组织中目前已报道的8个可能的肝癌干细胞标志物进行了免疫荧光标记, 利用试剂Hoechst33342(蓝色)标记细胞核定位, 异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC), 四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocyanate rhodamine)双荧光标记待测抗体, 荧光显微镜检测荧光位置及强度.
结果: 以4个切片中均能识别的细胞核做定位, 确定每个切片1个1×100显微镜视野中有效细胞的个数, 作出4个切片合并的细胞图谱, 建立了一种新颖的二维细胞识别技术. 检测得到有效细胞为2 772个. 检测的8个抗体均在肝癌细胞中表达, 并且不同肝癌细胞中肝癌干细胞标志物的表达情况不同, 同一肝癌细胞可同时表达多个肝癌干细胞的分子标志, 且可见8个抗体均阳性的肝癌细胞. 其中 2 772个有效细胞中有2 453个细胞为阴性, 所占比例为884.9‰.
结论: 完成了高通量二维细胞识别、定位技术方法的建立, 该方法可在一个肝癌干细胞上检测两种以上的肝癌干细胞分子标志的表达情况.
Keywords: 肝癌干细胞; 高通量; 二维技术; 细胞识别; 细胞定位