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世界华人消化杂志. 2011-07-08; 19(19): 1990-1995
Published online 2011-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i19.1990
Published online 2011-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i19.1990
P21对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制及对POLD1基因表达的调控
阮细玲, 李永继, 吴琼, 广西医科大学病理学 广西壮族自治区南宁市 530021
廖柳凤, 广西医科大学药理学 广西壮族自治区南宁市 530021
徐恒, 广西医科大学医学实验中心 广西壮族自治区南宁市 530021
阮细玲, 在读硕士, 主要从事胃癌、乳腺癌功能基因组学和蛋白质组学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30950028; 广西自然科学基金资助项目, No. 2010jjC40020; 广西医科大学实验中心开放课题基金资助项目, No. KFJJ2010-66.
作者贡献分布: 荧光定量PCR和Western blot等主要实验、数据分析和文章撰写由阮细玲完成; 细胞培养、质粒转染等由吴琼、李永继及廖柳凤协助完成; 课题指导、文章修改和审阅由徐恒完成.
通讯作者: 徐恒, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路22号, 广西医科大学医学实验中心. heng6888@yahoo.com
电话: 0771-5313093
收稿日期: 2011-05-06
修回日期: 2011-06-22
接受日期: 2011-06-28
在线出版日期: 2011-07-08
修回日期: 2011-06-22
接受日期: 2011-06-28
在线出版日期: 2011-07-08
Abstract
目的: 研究P21对POLD1基因的调控通路, 以探索阻断癌细胞恶性增殖的机制.
方法: 实验主要分3组: 阴性对照组(转染空载体pXJ41-neo的803-pXJ细胞)、空白对照组(胃癌细胞MGC-803)、实验组(转染P21重组真核表达质粒pXJ41-p21的803-p21细胞). MTT实验分析细胞增殖变化, 流式细胞仪检测细胞凋亡水平, 实时荧光定量PCR技术检测基因表达水平的变化, Western blot分析蛋白表达差异.
结果: MTT实验显示, 与空白对照和阴性对照组相比, 实验组细胞增殖受到明显抑制, 凋亡率(%)增高(11.36±0.51 vs 7.39±0.17, 7.69±0.47, F = 85.338, 均P<0.05). 实验组P21 mRNA表达水平显著提高(2.15±0.23 vs 1.05±0.11, 1.00±0.00, F = 59.054, 均P<0.05), POLD1则显著下调(0.45±0.07 vs 1.09±0.13, 1.00±0.00, F = 49.907, 均P<0.05); P21、P125蛋白表达变化与基因变化相一致. cyclin E、Rb1基因表达均上调, CDK2基因表达下调, c-myc基因表达则变化不大.
结论: P21抑制了胃癌细胞的增殖、促进其凋亡, 同时抑制了POLD1基因的表达, 这种抑制作用可能通过CDK2、cyclin E、Rb1等细胞周期因子实现.
Keywords: 胃癌; P21; POLD1; 表达调控