基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-06-08; 19(16): 1659-1665
Published online 2011-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i16.1659
TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响
王世美, 郑素军, 邢欣悦, 邓志华, 刘梅, 俞豪, 李长勇, 段钟平
王世美, 郑素军, 邢欣悦, 刘梅, 段钟平, 首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心 北京市 100069
王世美, 邓志华, 山西医科大学第二医院消化内科 山西省太原市 030001
俞豪, 李长勇, 首都医科大学细胞生物教研室 北京市 100069
王世美, 医师, 主要从事肝病基础与临床研究.
基金项目: "艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项课题基金资助项目, No. 2008ZX10002-005-3; 国家自然科学基金资助项目, No. 30800979; 北京自然科学基金资助项目, No. 7102085; 北京市科技新星基金资助项目, No. 2007B055; 首都医科大学基础-临床科研合作基金资助项目, No. 2007JL02; 2010JL02; 北京市教育委员会科技发展计划项目基金资助项目, No. KM201010025024.
作者贡献分布: 此课题由王世美与郑素军设计; 研究过程由王世美与邢欣悦操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由郑素军、邓志华、刘梅、俞豪、李长勇及段钟平提供; 数据分析由王世美与郑素军完成; 本论文写作由王世美与郑素军完成.
通讯作者: 郑素军, 100069, 北京市, 首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心. zhengsujun003@126.com
电话: 010-63291007
收稿日期: 2011-01-20
修回日期: 2011-03-16
接受日期: 2011-03-23
在线出版日期: 2011-06-08
Abstract

目的: 研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.

方法: MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响: 将BRL-3A细胞分为6组, 分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10 μg/L), 检测各组细胞24、36、48 h时的增殖活性; 进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1处理组和对照组, 分别给予和不予TGF-β1(8 μg/L), 进行如下检测: 流式细胞仪检测两组细胞24、36、48 h时的凋亡情况和细胞周期分布; 实时定量RT-PCR检测两组细胞24、36、48 h时Cyclin E、Cdk-2、EGF、HGF、Bcl-2、c-Myc、MMP9、NF-κB基因的表达变化.

结果: MTT结果显示, 各浓度TGF-β1组在24、36、48 h时的细胞增殖活性差异无统计学意义; 流式细胞仪分析结果显示, TGF-β1处理组24、36、48 h时的细胞凋亡率和细胞周期分布与对照组间的差异均无统计学意义; 实时定量RT-PCR发现, TGF-β1处理组相对于对照组, Cyclin E mRNA、Cdk2 mRNA、EGF mRNA在24 h时分别下调至0.194±0.103、0.181±0.064、0.634±0.116倍, 36 h时分别下调至0.379±0.173、0.457±0.123、0.619±0.112倍, 48 h时分别上调至1.956±0.215、2.17±0.471、7.66±0.437倍; HGF mRNA在24、36、48 h时均明显下调, 分别至0.152±0.068、0.146±0.053、0.158±0.061倍; Bcl-2 mRNA在24、36 h时无统计学差异, 48 h时上调至1.567±0.115倍; c-Myc mRNA、MMP9 mRNA、NF-κB mRNA在3个时刻均上调, 24 h时分别至1.742±0.389、3.484±0.411、1.625±0.369倍, 36 h时分别至2.292±0.361、1.563±0.323、1.486±0.494倍, 48 h时分别至2.499±0.475、2.233±0.493、3.612±0.364倍. 以上基因表达差异均有统计学意义(P<0.05).

结论: 大鼠肝细胞系BRL-3A对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用的敏感性低下, 可能与非Smads途径的激活, NF-κB、Bcl-2、c-Myc、MMP9表达的上调有关.

Keywords: 转化生长因子β1; BRL-3A细胞; 细胞凋亡; 细胞周期; 肝再生