基础研究
Copyright ©The Author(s) 2011. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2011-05-18; 19(14): 1463-1468
Published online 2011-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i14.1463
人宫颈癌基因RNA干扰真核表达载体的构建及其稳定转染胰腺癌细胞株的建立
张盛, 朱亚青, 张国新, 蒋佳凯
张盛, 朱亚青, 蒋佳凯, 常州市第三人民医院肝胆外科 江苏省常州市 213000
张国新, 南京医科大学第一附属医院消化科 江苏省南京市 210029
张盛, 主治医师, 主要从事肝胆胰相关外科方面的研究.
基金项目: 常州市社会发展科技计划基金资助项目, No. CS20102014.
作者贡献分布: 此课题由张国新与蒋佳凯设计; 研究过程由张盛与蒋佳凯操作完成; 本论文写作由张盛、朱亚青及蒋佳凯完成.
通讯作者: 蒋佳凯, 213000, 江苏省常州市, 常州市第三人民医院肝胆外科. jackjiang78@sina.com
收稿日期: 2011-02-16
修回日期: 2011-04-25
接受日期: 2011-05-05
在线出版日期: 2011-05-18
Abstract

目的: 构建针对人宫颈癌基因2(HCCR2)有效靶点的RNA干扰真核表达载体, 鉴定获得干扰质粒稳定转染的人胰腺癌PANC1细胞株.

方法: 设计并合成多个针对HCCR2基因的RNA干扰序列, 并将其插入真核表达慢病毒载体pGCsi-H1/Hygro/NEGative, 通过测序和与HCCR过表达载体共转染293T细胞后行Western blot检测, 筛选出有效干扰质粒; 通过脂质体转染法将该有效干扰质粒pGCsi-HCCR2稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1. 抗生素G418筛选获得稳转细胞株; Western blot检测稳转细胞株中HCCR2蛋白表达水平.

结果: HCCR2干扰载体和过表达载体共转染293T细胞后Western blot检测结果表明干扰质粒3具有最佳干扰效果, 选其作为最终干扰质粒. 将该质粒稳定转染至胰腺癌PANC1细胞后, Western blot检测显示, 干扰组的PANC1细胞株与空载体组比较, HCCR2蛋白表达水平下调, 表明获得HCCR2的RNA干扰质粒稳定转染的PANC1细胞株.

结论: 成功构建了HCCR2的RNA干扰真核表达载体及其稳定转染的人胰腺癌PANC1细胞株.

Keywords: RNA干扰; 人宫颈癌基因; PANC1细胞; 稳定转染