基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-04-08; 19(10): 1015-1021
Published online 2011-04-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i10.1015
miRNA干扰质粒的构建及其对肝癌HepG2细胞IGF-Ⅱ表达的抑制作用
姚宁华, 姚登福, 钱静, 董志珍, 邱历伟, 蔚丹丹
姚宁华, 姚登福, 邱历伟, 蔚丹丹, 南通大学附属医院临床医学研究中心 江苏省南通市 226001
钱静, 南通大学附属医院放疗科 江苏省南通市 226001
董志珍, 南通大学诊断学教研室 江苏省南通市 226001
姚宁华, 在读研究生, 主要从事恶性肿瘤早期诊断与发病机制的研究.
基金项目: 江苏省自然科学基金资助项目, No. BK2008187;南通大学自然科学基金资助项目, No. 09ZY013.
作者贡献分布: 主要实验、数据分析和文章起草由姚宁华、钱静及蔚丹丹完成; 细胞培养和质粒构建由姚宁华、钱静及邱历伟完成; 课题设计、文章修改和审阅由董志珍与姚登福完成.
通讯作者: 姚登福, 教授, 226001, 江苏省南通市西寺路20号, 南通大学附属医院临床医学研究中心. yaodf@ahnmc.com
电话: 0513-85052413 传真: 0513-85052523
收稿日期: 2011-01-09
修回日期: 2011-03-14
接受日期: 2011-03-23
在线出版日期: 2011-04-08
Abstract

目的: 研究miRNA干扰质粒对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝细胞癌表达的抑制作用, 探讨IGF-Ⅱ在肝细胞癌治疗中的价值.

方法: 以人IGF-Ⅱ基因序列设计并合成4条miRNA, 将miRNA插入质粒构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP miR 1-4干扰载体; 筛选、转染HepG2细胞, 以荧光定量PCR分析靶向肝癌IGF-Ⅱ基因表达的干扰效果; 以ELISA法比较转染前后IGF-Ⅱ蛋白表达水平.

结果: 测序证实, 成功构建了真核IGF-Ⅱ干扰质粒MR-IGF-Ⅱ-1-4, 将干扰质粒转染至HepG2细胞, 镜下显示转染效率50%; 经荧光定量PCR扩增, 沉默IGF-Ⅱ基因表达效率MR-IGF-Ⅱ-1为33%、MR-IGF-Ⅱ-2为43%、MR-IGF-Ⅱ-3为0%、MR-IGF-Ⅱ-4为3%. 将其中MR-IGF-Ⅱ-2转染至HepG2细胞, 在转录和蛋白水平上对IGF-Ⅱ具有较高干扰效率, 分别达43.0%和43.5%.

结论: 成功构建了人miRNA干扰质粒, 他能有效抑制HepG2细胞IGF-Ⅱ的表达.

Keywords: 肝细胞癌; 胰岛素样生长因子Ⅱ; 微小RNA; 质粒构建; 基因沉默