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肝细胞生长因子对肝癌细胞系SMMC-7721失巢凋亡的影响
谷艳娇, 辽宁医学院病理学教研室 辽宁省锦州市 121001
奥瑞芳, 山西省荣军医院病理科 山西省太原市 30031
苏荣健, 辽宁医学院科学实验中心 辽宁省高校分子细胞生物学和新药开发重点实验室 辽宁省锦州市 121001
基金项目: 辽宁省博士启动基金资助项目, No. 20061074; 辽宁省教育厅重点实验室基金资助项目, No. 2008S142.
作者贡献分布: 本研究由苏荣健提出设计并分析结果; 奥瑞芳与谷艳娇负责具体的实验操作; 论文撰写由苏荣健完成.
通讯作者: 苏荣健, 副教授, 121001, 辽宁省锦州市, 辽宁医学院科学实验中心, 辽宁省高校分子细胞生物学和新药开发重点实验室. rongjiansu@hotmail.com
电话: 0416-4673183
收稿日期: 2009-10-16
修回日期: 2010-01-28
接受日期: 2010-02-01
在线出版日期: 2010-03-18
修回日期: 2010-01-28
接受日期: 2010-02-01
在线出版日期: 2010-03-18
Abstract
目的: 探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及PI3K在该过程中的作用.
方法: 悬浮培养SMMC-7721, 建立失巢凋亡模型, 应用TUNEL染色观察凋亡率. 分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-7721及LY294002预处理后的HGF处理细胞, 用台盼蓝染色观察细胞失巢凋亡后存活率, 用MTT检测细胞的增殖能力的变化, 流式细胞仪检测失巢凋亡细胞的早、晚期凋亡率, Hoechst染色观察不同处理细胞的凋亡情况. 应用免疫印迹技术检测失巢凋亡后Akt、p-Akt、FAK、p-FAK的表达.
结果: TUNEL染色显示, 悬浮培养的SMMC-7721失巢凋亡率远大于贴壁培养的SMMC-7721(21.72%±6.85% vs 66.67%±7.66%,P<0.05); 台盼蓝染色显示, HGF处理后的SMMC-7721存活率明显高于悬浮培养细胞(P<0.05), 而HGF不能提高经LY294002预处理后细胞的存活率; MTT实验显示HGF处理细胞A值明显大于悬浮培养细胞(P<0.05), LY294002预处理细胞与悬浮培养细胞相似. 流式细胞仪和Hoechst 33258染色均显示HGF处理后细胞的失巢凋亡明显低于悬浮培养细胞(P<0.05), 而经LY294002处理后细胞的失巢凋亡率明显升高. 蛋白印迹结果显示HGF处理后细胞Akt、FAK、p-Akt、p-FAK的表达均升高, 而经LY294002预处理后, 其表达与悬浮培养SMMC-7721一致.
结论: 在肝细胞癌SMMC-7721失巢凋亡过程中, HGF通过活化Akt和FAK来增强细胞的抗失巢凋亡能力, 该作用受PI3K的调节.
Keywords: 肝细胞癌; 失巢凋亡; 肝细胞生长因子; Akt; 磷酸肌酸3激酶