基础研究
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世界华人消化杂志. 2010-03-18; 18(8): 755-760
Published online 2010-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i8.755
新型乙型肝炎病毒细胞感染模型的建立
姚永远, 马立宪, 赛林涛, 邵丽华, 关彦彦, 王刚
姚永远, 马立宪, 赛林涛, 关彦彦, 王刚, 山东大学齐鲁医院感染病科 山东省济南市 250012
邵丽华, 山东大学公共卫生学院 山东省济南市 250012
姚永远, 山东大学医学院在读硕士, 主要从事乙型病毒性肝炎发病机制的研究.
作者贡献分布: 马立宪与姚永远对此文所作贡献均等; 此课题由马立宪、姚永远及王刚设计; 研究过程由姚永远、赛林涛、关彦彦及王刚操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由马立宪与邵丽华提供; 数据分析由姚永远、赛林涛及关彦彦完成; 本论文写作由姚永远与马立宪完成.
通讯作者: 马立宪, 教授, 主任医师, 250012, 山东省济南市文化西路107号, 山东大学齐鲁医院感染病科. mlx@sdu.edu.cn
电话: 0531-82169388
收稿日期: 2009-11-07
修回日期: 2010-01-25
接受日期: 2010-02-01
在线出版日期: 2010-03-18
Abstract

目的: 建立一新型细胞株, 使该细胞株既能自然感染HBV又能传代培养, 评价杂交细胞对HBV的自然感染能力.

方法: 分离培养未携带HBV的人原代肝细胞, 与诱导突变的HepG2细胞进行融合得杂交细胞, 经HAT培养基筛选, 利用胰蛋白酶G显带技术鉴定所得细胞, 用含HBV的慢性乙型肝炎患者血清感染杂交细胞(同时感染HepG2作为对照), 巢式PCR检测感染后细胞内HBV DNA合成及分泌情况及有无HBV复制中间产物HBV cccDNA, 间接免疫荧光检测感染后细胞内HBcAg的表达, 电化学发光法检测感染后细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg.

结果: 成功建立人原代肝细胞与HepG2的杂交细胞, 能体外传代培养, 染色体核型分析示杂交细胞染色体众数为99条, 证实为融合细胞, HBV感染后第4天起, 杂交细胞内和培养上清中均能检测到HBV DNA, HBV感染后第3天起, 杂交细胞内可以检测到HBV的复制中间产物HBV cccDNA, HBV感染后第4天起, 杂交细胞胞质及部分胞核内HBcAg始终是阳性表达, 间接免疫荧光染色呈胞质弥漫性着色, 电化学发光法检测培养上清中HBsAg及HBeAg持续表达; 而感染后的HepG2细胞检测结果均为阴性.

结论: 成功建立的兼具有人原代肝细胞和HepG2遗传特性的杂交细胞株可以被慢性乙型肝炎患者血清中的HBV病毒自然感染, 可进一步用作研究HBV感染的体外细胞模型.

Keywords: 乙型肝炎病毒; 细胞模型; 细胞融合; 感染