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Cdc42基因在表皮生长因子促进HepG2细胞丝状伪足形成中的作用
张勇, 江隆昌, 胡青钢, 刘小卫, 熊俊, 郑启昌, 华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科 湖北省武汉市 430022
张勇, 博士, 主治医师, 主要从事肿瘤分子生物学及肝移植方面的研究.
作者贡献分布: 张勇与江隆昌对此文所作贡献均等; 此课题由张勇、江隆昌及郑启昌设计; 研究过程由张勇、江隆昌、胡青钢及刘小卫操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由郑启昌提供; 数据分析由刘小卫与熊俊完成; 本论文写作由张勇与江隆昌完成.
通讯作者: 郑启昌, 教授, 主任医师, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科. zqc654@21cn.com
电话: 027-85351623
收稿日期: 2009-11-06
修回日期: 2009-12-02
接受日期: 2009-12-07
在线出版日期: 2010-02-18
修回日期: 2009-12-02
接受日期: 2009-12-07
在线出版日期: 2010-02-18
Abstract
目的: 探讨表皮生长因子(EGF)对HepG2细胞丝状伪足形成和细胞体外侵袭能力的影响以及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在其中的作用.
方法: 将Cdc42 siRNA转染HepG2细胞株, RT-PCR和Western blot检测EGF组、EGF+siRNA干扰组、siRNA干扰组及空白对照组细胞Cdc42 mRNA转录以及蛋白的表达水平, 微丝绿色荧光探针(actin-tracker green)染色检测HepG2细胞丝状伪足形成, 侵袭小室检测细胞体外侵袭能力.
结果: 经EGF处理后HepG2细胞可见明显丝状伪足形成, EGF组细胞内Cdc42 mRNA及总蛋白(Total-Cdc42)表达量无显著变化, 但活性Cdc42(Active-Cdc42)显著增高(0.713±0.021 vs 0.423±0.015, P<0.05), siRNA干扰组Cdc42表达及活性受到明显抑制(0.118±0.017 vs 1.128±0.024; 0.351±0.021 vs 0.936±0.024, 均P<0.05), 并抑制EGF诱导的细胞丝状伪足形成, EGF组细胞体外侵袭能力显著高于其余各组(98.43±3.11 vs 61.09±3.58, 50.53±2.34, 62.73±2.64, 均P<0.05).
结论: EGF通过激活Cdc42诱导HepG2细胞丝状伪足形成并增强其体外侵袭能力.
Keywords: 细胞分裂周期蛋白42; 表皮生长因子; 肝癌; RNA干扰