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SD大鼠羊水间充质干细胞向神经样细胞体外诱导分化
冯建勋, 马艳, 毕晓娟, 新疆医科大学第一附属医院医学研究中心干细胞研究所 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000
冯建勋, 新疆医科大学第一附属医院博士后科研流动站 新疆乌鲁木齐市友谊医院肾内科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000
腊晓林, 新疆医科大学第一附属医院妇产科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000
温浩, 新疆医科大学第一附属医院肝胆外科 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000
冯建勋, 2009年新疆医科大学第一附属医院博士后科研流动站博士, 副主任医师, 主要从事干细胞的研究.
基金项目: 博士后科学基金资助项目, No. 20080431282.
作者贡献分布: 本研究由温浩指导, 冯建勋设计; 研究过程由冯建勋、腊晓林、马艳及毕晓娟操作完成; 数据分析与论文撰写由冯建勋完成; 温浩与腊晓林审阅.
通讯作者: 温浩, 主任医师, 830000, 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市, 新疆医科大学第一附属医院肝胆外科. dr.wenhao@163.com
电话: 0991-4362670
收稿日期: 2009-07-26
修回日期: 2009-11-20
接受日期: 2009-11-30
在线出版日期: 2010-01-28
修回日期: 2009-11-20
接受日期: 2009-11-30
在线出版日期: 2010-01-28
Abstract
目的: 探讨体外诱导羊水间充质干细胞(AF-MSCs)分化成神经干细胞.
方法: 10只SD怀孕大鼠, 180-240 g, 胎龄16 d, 过量腹腔麻醉致死, 开腹全部切除子宫, 在无菌的条件下抽取全羊水, 采用贴壁法分离AF-MSCs, 体外培养扩增, 观察细胞生长特性, 流式细胞仪检测AF-MSCs表面抗原表达及细胞周期. 取第3代AF-MSCs, 加入预诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、1 mmol/L β-MEM)诱导24 h, 然后加入诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、5 mmol/L β-MEM)诱导24 h, 最后在分化维持培养液(DMEM/F12、20 µg/L EGF、20 µg/L bFGF)中培养, 行免疫荧光染色, 检测NSE和GFAP的表达.
结果: 成功分离、培养和传代SD大鼠AF-MSCs, 流式细胞术检测提示大鼠AF-MSCs的G0/G1期细胞比例约为87.5%、S+G2+M期比例为12.5%, 表达CD44为98.3%、CD29为70%、和CD105为33.2%、不表达CD45为0.5%, CD34为1%, DLA-DR(MHC class II)为0.1%. 诱导后, AF-MSCs能表达神经细胞标示物NSE和GFAP, 且可在体外继续存活2 wk左右.
结论: 羊水中也存在MSCs, 与其他来源的MSCs特点相符; 羊水可以作为一种新的胎儿MSCs来源, 而且能在体外诱导分化为神经细胞.
Keywords: 羊水细胞; 间充质干细胞; 神经样细胞; 大鼠; 流式细胞术; 免疫细胞化学; 碱性成纤维细胞生长因子; 重组表皮生长因子