研究快报
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世界华人消化杂志. 2010-08-28; 18(24): 2579-2583
Published online 2010-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v18.i24.2579
幽门螺杆菌hp0596基因缺失突变体的构建
韩秀萍, 展德文, 王芃, 李丛胜, 袁盛凌, 陶好霞, 张丽, 邱炎, 李家奎, 刘纯杰
韩秀萍, 展德文, 王芃, 李丛胜, 袁盛凌, 陶好霞, 张丽, 邱炎, 刘纯杰, 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 北京市 100071
韩秀萍, 李家奎, 华中农业大学动物医学院 湖北省武汉市 430070
基金项目: 十一五863"疫苗与抗体工程"重大基金资助项目, No. 2006AA02A219; 十一五国家科技支撑计划基金资助项目, No. 2008BAI66B03; 十一五重大传染病专项课题基金资助项目, No. 2008ZX 10004-015.
作者贡献分布: 韩秀萍与展德文对此文所作贡献均等; 此课题由韩秀萍与王芃设计, 研究过程由韩秀萍、展德文、李丛胜、陶好霞、袁盛凌、张丽及邱炎操作完成; 本论文写作由韩秀萍、刘纯杰、李家奎及展德文完成.
通讯作者: 刘纯杰, 副研究员, 100071, 北京市丰台区东大街20号, 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所. liucj@nic.bmi.ac.cn
收稿日期: 2010-02-21
修回日期: 2010-05-02
接受日期: 2010-06-02
在线出版日期: 2010-08-28
Abstract

目的: 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)hp0596基因缺失突变体, 为进行hp0596基因功能研究奠定基础.

方法: 利用PCR技术, 从H. pylori 26695基因组分别扩增得到hp0596基因的上游同源臂和下游同源臂, 与两端带有FRT位点的氯霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体; 以重组载体为模板扩增打靶片段, 将其转化入H. pylori 26695; 在抗生素选择压力下, 打靶片段和菌体基因组发生同源重组, 通过氯霉素抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌.

结果: 构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示, 产生的条带与预计结果完全一致. PCR方法扩增突变株0596, cmr基因显示, 0596基因已经被完全敲除, 经DNA测序, RNA水平, 蛋白质水平证实筛选得到了0596基因缺失的H. pylori 26695△0596突变株. 连续培养7代后, H. pylori 26695△0596突变株具有良好的稳定性.

结论: 获得了H. pylori 26695△0596基因缺失突变体.

Keywords: 幽门螺杆菌; hp0596基因; 突变体