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世界华人消化杂志. 2010-08-18; 18(23): 2460-2463
Published online 2010-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i23.2460
Published online 2010-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i23.2460
DNA聚合酶β在食管癌组织中的修复功能
赵四敏, 漯河医学高等专科学校病理生理学教研室 河南省漯河市 462002
陈旭东, 漯河医学高等专科学校组织学与胚胎学教研室 河南省漯河市 462002
张成娟, 河南省肿瘤医院病理科 河南省郑州市 450001
赵国强, 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 河南省郑州市 450001
董子明, 郑州大学基础医学院病理生理学教研室 河南省郑州市 450001
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471952.
作者贡献分布: 此课题由董子明、赵国强及赵四敏设计; 研究过程由赵四敏、张成娟及赵国强操作完成; 数据分析由董子明与赵国强完成; 本论文写作由赵四敏与陈旭东完成.
通讯作者: 董子明, 教授, 450001, 河南省郑州市科学大道100号, 郑州大学基础医学院病理生理学教研室. dongziming@zzu.edu.cn
电话: 0395-2112101
收稿日期: 2010-03-18
修回日期: 2010-06-14
接受日期: 2010-06-28
在线出版日期: 2010-08-18
修回日期: 2010-06-14
接受日期: 2010-06-28
在线出版日期: 2010-08-18
Abstract
目的: 观察突变型DNA聚合酶β(DNA polymerase β, polβ)的碱基切除修复(base excision repair, BER)功能的改变.
方法: 将polβ真核表达载体pcDNA4-C-polβ1, pcDNA4-C-polβ2以脂质体介导方式转染polβ基因敲除的EC9706细胞, G418筛选得到稳定转染pcDNA4-C-polβ1, pcDNA4-C-polβ2的细胞克隆; 通过镍柱亲和层析法纯化蛋白; 退火合成含有单碱基缺失的DNA底物, 与纯化的野生型和突变型polβ蛋白进行BER修复实验.
结果: G418筛选得到稳定转染pcDNA4-C-polβ1, pcDNA4-C-polβ2的EC9706细胞; 提取并纯化出polβ1、polβ2蛋白与退火合成单碱基缺口的DNA底物进行BER实验. 在BER实验中, 野生型polβ能够在DNA底物的酶切位点处将其完全切开, 而突变型polβ仅将其部分切开.
结论: 野生型的polβ能够修复单碱基缺失的DNA底物, 而突变型的polβ碱基切除修复功能明显减弱.
Keywords: DNA聚合酶β; 镍柱亲和层析; 碱基切除修复