基础研究
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世界华人消化杂志. 2010-07-18; 18(20): 2077-2083
Published online 2010-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i20.2077
miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响以及对Bcl-2表达的调节
王驰, 钟鹰, 粟滔, 黄靓, 毛振江, 肖祥
王驰, 湖南省桑植县人民医院消化内科 湖南省张家界市 427100
钟鹰, 南华大学附属第二医院湘潭医院消化内科 湖南省湘潭市 411100
粟滔, 株洲化工厂总医院 湖南省株洲市 412007
黄靓, 毛振江, 南华大学附属第二医院消化内科 湖南省衡阳市 421001
肖祥, 湖南省浏阳市人民医院 湖南省浏阳市 410300
王驰, 主治医师, 现从事消化系肿瘤研究.
作者贡献分布: 王驰与钟鹰对此文所作贡献均等; 此课题由王驰与钟鹰设计; 研究过程由王驰、钟鹰、粟滔、黄靓、毛振江及肖祥共同操作完成; 研究所用试剂及分析工具由黄靓与毛振江提供; 数据分析由黄靓完成; 本论文写作由王驰与钟鹰完成.
通讯作者: 钟鹰, 主治医师, 411100, 湖南省湘潭市, 南华大学附属湘潭医院消化内科. zhongying7822@163.com
收稿日期: 2010-03-23
修回日期: 2010-05-25
接受日期: 2010-06-02
在线出版日期: 2010-07-18
Abstract

目的: 研究miR-200b对胃癌MGC-803细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用, 探讨miR-200b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.

方法: 用人工合成的miR-200b相应的双链互补DNA片段, 插入miRNASelectTM pEGP-miR载体, 经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒; 用脂质体将miR-200b高表达质粒转染进MGC-803胃癌细胞, 经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆. 构建Bcl-2高表达质粒, 转染入MGC-803胃癌细胞和含有miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中. 用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测Bcl-2的mRNA和蛋白表达; 用MTT法检测胃癌MGC-803细胞增殖的变化.

结果: Western blot结果显示, 与正常MGC-803细胞相比, 转染了miR-200b的胃癌MGC-803细胞中, Bcl-2蛋白的表达降低了56.91%, RT-PCR分析显示Bcl-2 mRNA表达降低了32.29%; MTT结果显示转染了miR-200b的细胞增殖受到显著抑制. 进一步的实验结果显示, 转染了Bcl-2高表达质粒的胃癌细胞增殖受到促进, 48 h最明显增加了16.82%, 然而转染了miR-200b和Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞增殖却下降了7.97%; Western blot结果显示, 与转染了pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞组相比, 转染了pEGP-miR-200b高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达降低了4.84倍, 而转染了pEGP-miR-200b和pCMV6-XL5-Bcl-2高表达质粒的MGC-803细胞中Bcl-2蛋白的表达量降低了1.76倍.

结论: 过表达的miR-200b抑制MGC-803胃癌细胞增殖, 这种抑制作用至少部分与Bcl-2基因的低表达有关.

Keywords: miR-200b; Bcl-2; MGC-803细胞