基础研究
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世界华人消化杂志. 2010-06-08; 18(16): 1643-1649
Published online 2010-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i16.1643
骨髓间充质干细胞共培养对肝星状细胞增殖、凋亡和RohA表达的调控
陈国忠, 姜海行, 陆正峰, 肖健, 梁梓宇, 覃山羽
陈国忠, 姜海行, 陆正峰, 肖健, 梁梓宇, 覃山羽, 广西医科大学第一附属医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
陈国忠, 广西医科大学在读博士, 主要从事干细胞及肝损伤修复机制研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, No. 0640133、No. 0897008; 广西"新世纪十百千人才工程"专项基金资助项目, No. 2006206.
作者贡献分布: 此课题由姜海行、陈国忠及覃山羽设计; 研究过程由陈国忠、陆正峰、肖健及梁梓宇操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由姜海行提供; 数据分析由陈国忠完成; 本论文写作由陈国忠完成.
通讯作者: 姜海行, 教授, 博士生导师, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学第一附属医院消化内科. jihaxi@263.net
电话: 0771-5356501 传真: 0771-5353668
收稿日期: 2010-02-26
修回日期: 2010-04-29
接受日期: 2010-05-10
在线出版日期: 2010-06-08
Abstract

目的: 观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养对肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡和RohA表达的影响, 探讨BMSCs旁分泌HGF在其中的作用机制. 

方法: 贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs, 传代至第4代使用; 大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用. 应用6孔塑料细胞培养盒, 每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系, 常规培养. 实验分4组: 空白对照组、阴性对照组、BMSCs实验组、预处理实验组(c-met多克隆抗体预处理). 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSCs细胞增殖能力; 流式细胞仪检测细胞凋亡; RT-PCR、Western blot检测BMSCs与HSCs共培养后HSCs内RohA mRNA和蛋白的表达. 酶联免疫吸附法(ELISA)检测BMSCs与HSCs共培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)浓度. 

结果: BMSCs对HSCs增殖具有抑制作用, BMSCs与HSCs共培养后24 h、48 h的增殖抑制率分别为12.21%, 35.43%, 与空白对照组、实验对照组和C-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01). Annexin-V-FITC/PI双染法检测BMSCs与HSCs共培养48 h后HSCs的凋亡率为25.80%, 与空白对照组、实验对照组与c-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01). BMSCs与HSCs共培养48 h, BMSCs组RohA mRNA的表达抑制明显, 且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组, 有显著性差异(P<0.01). BMSCs与HSCs共培养48 h RohA蛋白的表达明显抑制, 且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组, 有显著性差异(P<0.01). ELISA检测BMSCs与HSCs共培养24 h、48 h上清液中HGF浓度分别为250 ng/L与570 ng/L, 明显高于单独BMSCs培养和单独HSCs培养, 有显著性差异(P<0.01).

结论: BMSCs与HSCs共培养能抑制HSCs的增殖, 促进凋亡, 抑制RohA表达, 其机制可能是通过BMSCs旁分泌HGF发挥抑制大鼠HSCs增殖, 促进凋亡的作用.

Keywords: 骨髓间充质干细胞; 肝星状细胞; 共培养; 细胞凋亡; 肝细胞生长因子; RohA