Published online 2010-05-28. doi: 10.11569/wcjd.v18.i15.1531
修回日期: 2010-05-05
接受日期: 2010-05-10
在线出版日期: 2010-05-28
目的: 探讨野生型XPD基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.
方法: 用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD, 提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定. 实验分4组, 重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组, 并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照. 用脂质体转染法瞬时转染四组细胞. 荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况. 提取各组细胞总RNA, 合成cDNA, 用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况. 并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化.
结果: pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比, XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018 vs 0.561±0.039, 0.544±0.035, 0.542±0.034, 均P<0.01). pEGFP-N2-XPD细胞中p53 mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019 vs 0.256±0.014, 0.267±0.015, 0.274±0.018, 均P<0.01). pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比, cyclin D1 mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041 vs 0.560±0.039, 0.558±0.050, 0.560±0.041, 均P<0.01). pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比, c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045 vs 0.570±0.075, 0.560±0.041, 0.537±0.050, 均P<0.01). 流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%, S期为11.83%, 其他组Gl期分别为65.54%、56.61%、63.26%; S期分别为24.10%、29.52%、27.28%, 结果具有统计学意义(P<0.05). MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02, 与其他组相比, 细胞增殖力明显减弱(P<0.01).
结论: 野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长, XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达, 增加p53基因表达.