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世界华人消化杂志. 2010-05-18; 18(14): 1485-1488
Published online 2010-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i14.1485
Published online 2010-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i14.1485
稳定干扰Pin1基因的食管癌细胞株的筛选及其生物学特征
李玲, 陈平, 赵继敏, 马俊芬, 董子明, 郑州大学基础医学院病理生理教研室 河南省郑州市 450001
连鸿凯, 郑州市骨科医院 河南省郑州市 450001
作者贡献分布: 李玲与陈平对此文所作贡献均等; 此课题由李玲、陈平及董子明设计; 研究过程由李玲与陈平操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由赵继敏、马俊芬及连鸿凯提供; 数据分析由李玲与陈平完成; 本论文写作由李玲与陈平完成.
通讯作者: 董子明, 教授, 450001, 河南省郑州市, 郑州大学基础医学院病理生理教研室. dongzm@zzu.edu.cn
电话: 0371-67781956
收稿日期: 2010-03-18
修回日期: 2010-04-20
接受日期: 2010-05-10
在线出版日期: 2010-05-18
修回日期: 2010-04-20
接受日期: 2010-05-10
在线出版日期: 2010-05-18
Abstract
目的: 筛选稳定干扰Pin1的食管癌细胞系, 研究Pin1表达与食管癌细胞生物学特征的关系.
方法: 将针对Pin1基因的shRNA(pmU6-Pin1)转染入EC1细胞, 经G418加压筛选稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株, 用免疫印迹法检测细胞中Pin1的表达, 确定筛选细胞系的正确性. 通过MTT实验以及流式细胞仪检测Pin1抑制对食管癌细胞增殖、凋亡的影响.
结果: Western blot检测结果显示, Pin1蛋白表达被成功抑制, 建立了稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株(shPin1). 与正常EC1细胞比较, MTT实验和流式细胞术实验结果表明基因沉默Pin1抑制食管癌细胞增殖(抑制率为51.8%), 诱导细胞凋亡(凋亡率为46.39%); 并增加了食管癌细胞EC1对顺铂的敏感性, 抑制食管癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的能力均有所增强, 抑制率从23.5%上升到61.0%, 凋亡率从26.10%上升到58.95%.
结论: 稳定干扰Pin1食管癌细胞系的建立为进一步研究Pin1在食管癌中的作用提供了研究平台; 基因沉默Pin1增加了食管癌细胞对顺铂的敏感性.
Keywords: 稳定干扰; Pin1; 增殖; 凋亡; 顺铂