基础研究
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世界华人消化杂志. 2010-04-18; 18(11): 1109-1114
Published online 2010-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v18.i11.1109
HBx基因缺失突变体HBx-d382对L02细胞增殖及非锚定依赖生长能力的影响
胡志亮, 谭德明, 侯周华, 谢萍, 刘国珍, 欧阳奕, 刘菲, 刘洪波
胡志亮, 谭德明, 侯周华, 谢萍, 刘国珍, 欧阳奕, 刘菲, 刘洪波, 中南大学附属湘雅医院传染科 湖南省长沙市 410087
胡志亮, 中南大学附属湘雅医院博士, 从事乙型肝炎病毒与肝癌的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30872228.
作者贡献分布: 此课题由胡志亮、谭德明及侯周华设计; 研究过程由胡志亮、侯周华、谢萍、欧阳奕、刘菲及刘洪波操作完成; 数据分析由胡志亮、谭德明及刘国珍完成; 本论文写作由胡志亮、谭德明及刘国珍完成.
通讯作者: 谭德明, 教授, 410087, 湖南省长沙市湘雅路87号, 中南大学附属湘雅医院传染科. dmt2008@yahoo.com.cn
电话: 0731-84327221
收稿日期: 2010-01-28
修回日期: 2010-03-22
接受日期: 2010-03-29
在线出版日期: 2010-04-18
Abstract

目的: 建立稳定表达HBx基因缺失突变体(HBx-d382)的L02肝细胞株, 并探讨其对L02细胞增殖的影响.

方法: 含HBx-d382重组质粒(pcDNA3.0/HBx-d382)经过PCR扩增、双酶切及测序鉴定后, 通过脂质体转染和G418筛选获得稳定表达HBx-d382的L02肝细胞株. PCR鉴定基因组中HBx-d382基因整合. RT-PCR和Western blot鉴定其表达, 进一步通过MTT法, 软琼脂克隆形成实验检测HBx-d382对L02细胞增殖及非锚定依赖生长能力的影响. 用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.

结果: 经PCR扩增、双酶切及测序鉴定HBx-d382重组质粒构建正确. 稳定转染该质粒的L02细胞基因组存在HBx-d382整合. RT-PCR及Western blot表明在RNA水平和蛋白水平存在HBx-d382表达, 稳定表达HBx-d382的L02细胞其增殖能力和非锚定生长能力增强, S+G2期细胞比例升高.

结论: 成功构建了HBx缺失突变体的真核表达模型, 证实HBx缺失突变体能影响细胞增殖, 这种效应可能与其影响细胞周期调控相关.

Keywords: HBx; 突变; 增殖; 细胞周期