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抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响
王汉卿, 孙震晓, 北京中医药大学中药学院 北京市 100102
王汉卿, 北京中医药大学硕士, 主要从事分子细胞药理方向的研究.
作者贡献分布: 此课题由孙震晓与王汉卿设计; 研究过程由王汉卿操作完成; 研究所用试剂及分析工具由孙震晓提供; 数据分析由王汉卿完成; 本论文写作主要由王汉卿完成.
通讯作者: 孙震晓, 100102, 北京市, 北京中医药大学中药学院.sunzxcn@hotmail.com
电话: 010-84738646
收稿日期: 2008-10-16
修回日期: 2008-11-19
接受日期: 2008-11-24
在线出版日期: 2009-03-08
修回日期: 2008-11-19
接受日期: 2008-11-24
在线出版日期: 2009-03-08
Abstract
目的: 探讨抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响及其机制.
方法: 采用脂质体转染法将带有全长Pdcd4 cDNA的质粒转入BGC-823细胞, MTT法测定羟基喜树碱对Pdcd4cDNA转染BGC-823细胞的生长抑制作用, 流式细胞术检测羟基喜树碱作用前后细胞周期和凋亡率的变化, Western blot蛋白印迹法检测Pdcd4蛋白表达.
结果: 建立了稳定转染Pdcd4cDNA的BGC- 823细胞系; 羟基喜树碱作用转染细胞24, 72 h后, 药物对Pdcd4cDNA转染组细胞的半数抑制浓度均低于两对照组(pCDNA3.1与pCDNA-Pdcd4-D418A)(74.48 μmol/L vs 87.67, 102.30 μmol/L; 14.30 μmol/L vs 40.59, 29.54 μmol/L, 均P<0.05); 流式细胞仪测定结果表明, 80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞24 h, 处于细胞周期G0/G1期的细胞比例下降, S期细胞比例升高, 出现细胞周期S期阻滞, 72 h, 细胞凋亡率显著升高(pCDNA3.1: 45.40% vs 5.65%; pCDNA-Pdcd4-D418A: 36.21% vs 3.07%; pCDNA-Pdcd4: 46.17% vs 4.25%, P<0.05); Western blot结果表明80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞72 h, Pdcd4蛋白表达水平升高.
结论: 提高人胃腺癌细胞BGC-823中Pdcd4蛋白的表达能增强其对羟基喜树碱的敏感性; 羟基喜树碱能引起BGC-823细胞S期阻滞, 并能诱导细胞凋亡; 羟基喜树碱本身也可上调BGC-823中Pdcd4的表达.
Keywords: 程序性细胞凋亡因子4; 羟基喜树碱; 人胃腺癌; BGC-823细胞