基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-02-28; 17(6): 573-577
Published online 2009-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i6.573
应用空斑形成法检测五种不同细胞对肠道病毒71型的敏感性
杨子峰, 秦笙, 莫自耀, 关文达, 王玉涛
杨子峰, 莫自耀, 关文达, 王玉涛, 秦 笙, 呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院)·广州医学院第一附属医院 广东省广州市 510230
杨子峰, 助理研究员, 主要从事临床病毒学与抗病毒药物的研究.
基金项目: 广州市重大科技基金资助项目, No. 2007Z1-E0111.
作者贡献分布: 杨子峰, 秦笙, 莫自耀, 关文达及王玉涛对此文所做贡献均等; 此课题由杨子峰和秦笙设计; 研究过程由杨子峰与秦笙独立完成; 研究所用试剂及分析工具由莫自耀提供; 数据分析由杨子峰, 秦笙, 关文达及王玉涛完成; 本论文写作由杨子峰, 莫自耀及秦笙完成.
通讯作者: 莫自耀, 510230, 广东省广州市, 呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院)·广州医学院第一附属医院. moziyao@163.net
收稿日期: 2008-12-26
修回日期: 2009-01-24
接受日期: 2009-02-09
在线出版日期: 2009-02-28
Abstract

目的: 建立肠道病毒71型(EV71)的空班形成方法, 并比较BGM、VeroE6、MRC-5、HEp-2及A549五种细胞对EV71病毒的敏感性.

方法: 将不同稀释浓度的EV71病毒接种到五种细胞, 分别覆盖三种不同的培养物, 孵育一定时间后固定染色, 比较出斑效果; 以新建空斑形成法测定五种细胞感染EV71 24-96 h后培养液滴度, 计算空班形成单位(pfu).

结果: 在五种细胞中, BGM和VeroE6覆盖琼脂糖凝胶的EV71可形成针尖样空班; 覆盖1%甲基纤维素的EV71可形成直径大约1 mm圆形或类圆形空班, 形成空斑单位最多, 病毒滴度分别达2.87×109 pfu/L和1.65×109 pfu/L; 覆盖1.2%艾维素的EV71在BGM细胞中可形成直径大约0.5 mm类圆形空斑, 在VeroE6细胞中形成针尖样空斑; 其他细胞均形成针尖样空斑.

结论: 空斑形成方法可对肠道病毒进行定量检测, BGM及VeroE6细胞为EV71的敏感细胞.

Keywords: 肠道病毒71型; 空斑形成试验; 细胞; 定量测定