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MUC5AC特异性siRNA对胆管癌细胞株HCCC-9810增殖及凋亡的影响
黄强, 任雪峰, 刘臣海, 齐伟, 安徽医科大学附属省立医院普通外科 安徽省合肥市 230001
黄强, 硕士, 教授, 主任医师, 硕士研究生导师, 主要从事肝胆胰疾病的基础与临床研究.
基金项目: 2007年度院科研基金资助项目, No. 200775.
作者贡献分布: 本研究的设计由黄强与任雪峰完成, 实验操作由任雪峰完成; 刘臣海与齐伟参与论文资料查询、整理; 数据统计及图像处理由刘臣海完成; 论文写作由黄强与任雪峰完成.
通讯作者: 黄强, 230001, 安徽省合肥市, 安徽医科大学附属省立医院普通外科. hq-sohu@sohu.com
电话: 0551-2283280
收稿日期: 2008-12-17
修回日期: 2009-01-05
接受日期: 2009-01-12
在线出版日期: 2009-02-28
修回日期: 2009-01-05
接受日期: 2009-01-12
在线出版日期: 2009-02-28
Abstract
目的: 探讨黏蛋白5AC特异性siRNA对人肝内胆管癌细胞珠HCCC-9810体外增殖及凋亡能力的影响.
方法: 设计合成三对特异性siRNA, 构建了三个可在哺乳动物细胞中表达siRNA的表达质粒, pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3, 应用脂质体转染技术分别将三个稳定表达的质粒和对照质粒(空质粒对照)转染HCCC-9810, 应用有荧光标记的非特异性小分子的siRNA检测转染效率, RT-PCR检测黏蛋白5AC基因mRNA水平; SABC免疫组化染色技术检测黏蛋白5AC的表达; MTT检测细胞生长增殖情况; 流式细胞仪分析细胞凋亡.
结果: 基因测序表明成功构建质粒; 转染后荧光蛋白表达率28.57%; RT-PCR结果表明在mRNA水平, 三个质粒都可抑制黏蛋白5AC基因的表达, 并可使黏蛋白5AC的表达下降, MTT结果对细胞的生长有一定的抑制作用, 流式细胞仪分析结果使肿瘤细胞凋亡增加.
结论: 构建pRNAT-U6.1/Neo-MUC5AC-siRNA1/2/3质粒明显抑制了黏蛋白5AC基因在mRNA水平及蛋白的表达, 并可抑制肿瘤细胞的生长增殖和诱导其凋亡.
Keywords: HCCC-9810细胞; 胆管癌; 黏蛋白5AC; RNA干扰; 细胞增殖; 细胞凋亡