基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-12-08; 17(34): 3497-3501
Published online 2009-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i34.3497
针对HBV S基因mRNA反义锁核酸设计及其在2.2.15细胞内的抗病毒作用
邓益斌, 王燕菲
邓益斌, 右江民族医学院附属医院医学检验中心 广西壮族自治区百色市 533000
王燕菲, 广州医学院生物化学与分子生物学教研室 广东省广州市 510182
邓益斌, 2009年广东省广州医学院硕士, 主要从事基因诊断与基因治疗的研究.
基金项目: 广州市科技攻关计划基金资助项目, No. 2002Z3-E4081.
作者贡献分布: 该实验由邓益斌设计; 实验过程由邓益斌操作完成; 实验研究所需经费由王燕菲提供; 数据分析由邓益斌完成; 论文写作由邓益斌完成, 王燕菲提出修改意见.
通讯作者: 王燕菲, 教授, 510182, 广东省广州市东风西路195号, 广州医学院生物化学与分子生物学教研室. yanfeiw@hotmail.com
电话: 020-81340212
收稿日期: 2009-08-18
修回日期: 2009-10-20
接受日期: 2009-10-26
在线出版日期: 2009-12-08
Abstract

目的: 探讨针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因翻译起始区反义锁核酸(LNA)片段在HepG22.2.15细胞内抗病毒效果及有效LNA序列筛选.

方法: 设计合成互补于HBV S基因mRNA翻译起始区同一位点的4条不同序列长度LNA片段及无关对照序列, 以阳离子脂质体介导, 作用于HepG22.2.15细胞, 采用ELISA法和FQ-PCR法分别监测24、48和72 h细胞培养上清液中HBsAg和HBV DNA的含量; MTT法检测LNA对细胞代谢的影响.

结果: 4条不同序列长度(10、15、20及25个碱基)的反义LNA对HBsAg的表达和HBV DNA的复制均有显著性抑制作用, 72 h后的抑制率分别为46.58%、54.38%、72.43%、69.92%及27.09%、28.77%、34.71%、32.68%, 且抑制率随时间呈增高趋势. LNA对细胞代谢无明显影响.

结论: 针对HBV S基因mRNA翻译起始区的反义LNA短序列体外能显著抑制HBV基因的表达, 且抑制作用最强的序列长度应在15-25个碱基之间.

Keywords: 乙型肝炎病毒; 锁核酸; 2.2.15细胞; 基因治疗; 脂质体