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世界华人消化杂志. 2009-11-18; 17(32): 3342-3345
Published online 2009-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i32.3342
Published online 2009-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i32.3342
新肿瘤睾丸抗原Ropporin重组蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
尹燕华, 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系 湖北省武汉市 430030
李占飞, 邹声泉, 华中科技大学同济医学院附属同济医院外科 湖北省武汉市 430030
基金项目: 教育部留学回国人员科研启动基金资助项目, No. 2009-08.
作者贡献分布: 此课题由李占飞与邹声泉设计; 实验、数据分析和论文写作均由尹燕华和李占飞共同完成; 邹声泉对文稿进行修改和审核.
通讯作者: 李占飞, 主治医师, 430030, 湖北省武汉市汉口解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院外科. lezhfei@hotmail.com
电话: 027-83663813
收稿日期: 2009-06-08
修回日期: 2009-09-29
接受日期: 2009-10-12
在线出版日期: 2009-11-18
修回日期: 2009-09-29
接受日期: 2009-10-12
在线出版日期: 2009-11-18
Abstract
目的: 构建新肿瘤睾丸抗原Ropporin原核表达载体, 表达和纯化人Ropporin重组蛋白, 并制备其兔抗血清.
方法: 人Ropporin全长cDNA克隆入pQE30载体, 在大肠杆菌中利用IPTG诱导表达并纯化人Ropporin重组蛋白. 利用人Ropporin重组蛋白免疫兔, 制备人Ropporin多克隆抗体.
结果: 以构建的pQE30-Ropporin质粒转化大肠杆菌后, 在IPTG诱导下表达和纯化得到相对分子质量与鼠Ropporin蛋白一致的蛋白质, 利用其免疫动物后, Western blot检测显示该蛋白具有良好的免疫原性, 制备的兔抗血清效价>1:512000, 对该蛋白具有高度特异性.
结论: 利用大肠杆菌原核表达系统表达和纯化了人Ropporin重组蛋白, 并成功制备了人Ropporin多克隆抗体.
Keywords: Ropporin; 肿瘤睾丸抗原; 原核表达; 多克隆抗体