基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-11-18; 17(32): 3283-3291
Published online 2009-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i32.3283
骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达
苏思标, 姜海行, 王东旭, 覃山羽, 梁梓宇
苏思标, 姜海行, 王东旭, 覃山羽, 梁梓宇, 广西医科大学第一附属医院消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
苏思标, 广西医科大学硕士研究生, 主要从事干细胞及肝损伤修复机制研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, No. 0640133, No. 0897008.
作者贡献分布: 此课题姜海行、苏思标及王东旭设计; 研究过程由苏思标、王东旭、覃山羽及梁梓宇操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由姜海行提供; 数据分析由苏思标完成; 本论文写作由苏思标完成.
通讯作者: 姜海行, 教授, 博士生导师, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学第一附属医院消化内科. jihaxi@263.net
电话: 0771-5356501 传真: 0771-5353668
收稿日期: 2009-08-04
修回日期: 2009-09-22
接受日期: 2009-09-28
在线出版日期: 2009-11-18
Abstract

目的: 观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对肝星状细胞(HSCs)RhoA信号因子及其细胞周期调控因子P27表达的影响, 探讨MSCs调控HSCs细胞周期G1/S转换机制.

方法: 贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠MSCs, 传代至第4代使用; 大鼠肝星状细胞(HSC-T6) 系及纤维原细胞系冻融后传代使用. 应用6孔塑料细胞培养盒, 每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系, 常规培养. 实验分3组: 空白对照组、阴性对照组、MSCs实验组. 用WST-8法对HSCs增殖率进行测定; 流式细胞仪检测细胞周期; RT-PCR、Western blot检测MSCs与HSCs共培养后HSCs内RhoA, P27 mRNA和蛋白的表达.

结果: (1)HSCs与MSCs共培养24 h后, HSCs表现明显增殖抑制(P<0.01), 且呈现时间依赖性. MSCs实验组与空白对照组、阴性对照组比较均有显著性差异(均P<0.01). (2)共培养12 h后, MSCs可阻滞HSCs由G0/G1期向S期转换, 使G0/G1期细胞增多, S期细胞减少, 与空白对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01). (3)共培养12 h后, MSCs实验组RhoA mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(P<0.05, P<0.01), 随时间的延长呈递减趋势; 共培养后, MSCs实验组P27 mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均无统计学差异. (4)共培养12 h后, MSCs实验组RhoA蛋白表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01), 随时间的延长呈递减趋势; 共培养12 h后, MSCs实验组P27蛋白与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01), 随时间的延长呈递增趋势. (5)相关性分析显示: RhoA与P27 mRNA的表达无明显相关(r = -0.105); RhoA与P27蛋白的表达呈显著负相关(r = -0.943, P<0.01).

结论: MSCs抑制HSCs增殖的机制可能是通过RhoA-P27通路调控HSCs细胞周期改变; RhoA活性的下调可能是引起HSCs内P27蛋白表达增加的原因.

Keywords: 骨髓间充质干细胞; 肝星状细胞; RhoA; P27; 细胞周期