基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-01-28; 17(3): 241-246
Published online 2009-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i3.241
携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡
刘永靖, 陈飞虎, 苏长青, 王星华, 钱炎珍, 钱其军
刘永靖, 中国人民解放军第105医院胸心外科 安徽省合肥市 230031
陈飞虎, 安徽医科大学药学院 安徽省合肥市 230032
苏长青, 王星华, 钱炎珍, 钱其军, 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒-基因实验室 上海市 200438
刘永靖, 主治医师, 主要从事肿瘤的生物治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金国际合作重大资助项目, No. 30120160823; 南京军区重大专项课题资助项目, No. 07Z006.
作者贡献分布: 该实验课题由刘永靖, 钱其军及陈飞虎酝酿设计; 实验过程由刘永靖与钱炎珍操作完成; 实验研究所用试剂及仪器由陈飞虎与钱其军提供; 数据分析由刘永靖完成; 论文写作由刘永靖完成, 苏长青及王星华提出修改和指导建议.
通讯作者: 刘永靖, 230031, 安徽省合肥市长江西路424号, 中国人民解放军第105医院胸心外科. yongjingliu@163.com
电话: 0551-2163212
收稿日期: 2008-11-03
修回日期: 2008-12-12
接受日期: 2008-12-15
在线出版日期: 2009-01-28
Abstract

目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.

方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68, 通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.

结果: CNHK500-hTRAIL能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡, 均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.

结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.

Keywords: 基因治疗; 腺病毒; 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体; 凋亡; 肝细胞癌; 四甲基偶氮唑蓝; 流式细胞术