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世界华人消化杂志. 2009-09-28; 17(27): 2767-2772
Published online 2009-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i27.2767
Published online 2009-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i27.2767
三叶因子2相互作用蛋白基因在胃癌细胞cDNA文库中的筛选
詹晓娟, 许鸿志, 董菁, 周飞, 潘金水, 肖鸿敏, 厦门大学附属中山医院消化内科 福建省厦门市 361004
任建林, 厦门大学附属中山医院消化内科 厦门大学消化疾病研究所 厦门市消化疾病中心 福建省厦门市 361004
詹晓娟, 硕士, 主要从事消化系疾病研究.
作者贡献分布: 詹晓娟与任建林对此文所作贡献均等; 此课题由任建林、董菁及詹晓娟设计; 研究过程由詹晓娟、董菁、周飞、潘金水、许鸿志及肖鸿敏操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由詹晓娟提供; 数据分析由詹晓娟、董菁及任建林完成; 本论文写作由詹晓娟与任建林完成.
通讯作者: 任建林, 教授, 博士生导师, 361004, 福建省厦门市, 厦门大学附属中山医院消化内科, 厦门大学消化疾病研究所, 厦门市消化疾病中心. jianlinr@msn.com
电话: 0592-2993170 传真: 0592-2993170
收稿日期: 2009-06-03
修回日期: 2009-08-24
接受日期: 2009-08-31
在线出版日期: 2009-09-28
修回日期: 2009-08-24
接受日期: 2009-08-31
在线出版日期: 2009-09-28
Abstract
目的: 筛选并克隆人胃癌细胞cDNA文库中与三叶因子2(trefoil factor family 2, TFF2)蛋白相互作用的蛋白基因.
方法: RT-PCR方法验证胃癌细胞存在TFF2 mRNA表达; PCR法扩增TFF2基因, NotⅠ与SalⅠ双酶切后定向克隆到酵母表达载体pDEST32, 构建TFF2的诱饵质粒; Western blot验证TFF2诱饵质粒在酵母细胞中相应融合蛋白的表达; 将诱饵质粒和人胃癌-cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母感受态细胞, 通过营养缺陷型培养基(Ura、His)与X-gal进行3重筛选阳性克隆, 提取阳性克隆质粒测序, 应用蛋白质数据库及生物信息学技术, 对测序结果进行分析.
结果: RT-PCR法证实胃癌细胞中存在TFF2 mRNA表达; 构建pDEST32-TFF2诱饵表达质粒成功; Western blot法证实诱饵质粒转化酵母细胞后正确表达TFF2-GAL4DBD融合蛋白; 通过酵母双杂交筛选胃癌细胞cDNA文库, 共获得35个表达His、Ura及X-gal报告基因的阳性克隆, 其中测序成功为16个克隆, 包含12个已知蛋白基因与4个未知功能基因.
结论: 从胃癌细胞cDNA文库中筛选出多种TFF2相互作用蛋白基因, 其可能与胃癌的发生发展密切相关.
Keywords: 解痉多肽; 胃癌; 相互作用蛋白