基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-08-08; 17(22): 2244-2250
Published online 2009-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i22.2244
siRNA降低COX-2基因表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响
葛金华, 朱月永, 刘豫瑞, 江家骥, 董菁
葛金华, 朱月永, 刘豫瑞, 江家骥, 董菁, 福建医科大学附属第一医院肝病中心 福建省福州市 350005
葛金华, 福建医科大学附属第一医院肝病中心在读硕士, 主要从事肝脏疾病研究.
作者贡献分布: 葛金华与朱月永对此文所作贡献均等; 此课题由朱月永与葛金华设计; 研究过程由葛金华操作完成; 研究所用试剂及分析工具由刘豫瑞提供; 数据分析由葛金华完成; 本论文写作由葛金华、朱月永、江家骥及董菁完成.
通讯作者: 朱月永, 医学博士, 副教授, 350005, 福建省福州市, 福建医科大学附属第一医院肝病中心. ezhu066@sina.com
收稿日期: 2009-05-21
修回日期: 2009-07-03
接受日期: 2009-07-06
在线出版日期: 2009-08-08
Abstract

目的: 探讨小干扰RNA降低环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)基因对肝癌细胞HepG2增殖与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)表达的影响.

方法: 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为4组: COX-2 siRNA干预组、阴性对照siRNA组、空脂质体组、空白对照组. 脂质体转染法将COX-2 siRNA转染入HepG2细胞; MTT法测定转染后24, 48, 72 h的增殖抑制率; 流式细胞仪测定转染后24 h的细胞周期分布; 半定量RT-PCR与Western blot检测转染后24 h肝癌细胞COX-2和ERK1/2的表达.

结果: COX-2 siRNA干预组的增殖抑制率明显高于阴性对照组和空脂质体转染组(67.08% vs 2.45%, 1.56%, 均P<0.01); COX-2 siRNA干预组G1期细胞明显增多, 与空白组、空脂质体组及阴性对照组相比, 均具有显著差异(72.80% vs 50.27%, 50.97%, 53.13%, 均P<0.05); RT-PCR显示: COX-2 siRNA干预组COX-2, ERK1, ERK2 mRNA表达(0.58, 0.32, 0.48)明显降低, 与空白组(0.93, 0.76, 0.72)、空脂质体组(0.89, 0.64, 0.67)及阴性对照组(0.83, 0.71, 0.65)比较, 差异具有统计学意义(均P<0.05), Western blot显示以上各项指标表达趋势与RT-PCR相同.

结论: 小干扰RNA可降低肝癌细胞HepG2的COX-2基因表达, 抑制肝癌细胞的生长. COX-2促进肝癌生长可能与ERK1/2通路调控有关.

Keywords: 环氧化酶-2; 细胞外信号调节蛋白激酶; 小干扰RNA; HepG2细胞