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世界华人消化杂志. 2009-06-18; 17(17): 1768-1771
Published online 2009-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i17.1768
Published online 2009-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i17.1768
幽门螺杆菌GGT基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
张尤历, 唐炜, 陈慧娟, 江苏大学附属医院 江苏省镇江市 212001
王文兵, 江苏大学生命科学研究院 江苏省镇江市 212013
周武松, 安徽农业大学生命科学研究院 安徽省合肥市 230036
基金项目: 江苏省社会发展基金资助项目, No. BS2006041.
作者贡献分布: 张尤历与唐炜对此文所作贡献均等; 此课题由张尤历与王文兵共同设计; 研究过程由张尤历、唐炜及周武松操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由张尤历提供, 数据分析由唐炜、陈慧娟及周武松完成, 本论文写作由张尤历与唐炜完成.
通讯作者: 张尤历, 教授, 212001, 江苏省镇江市解放路438号, 江苏大学附属医院消化内科. zjtangwei@163.com
电话: 0511-85011787
收稿日期: 2009-04-11
修回日期: 2009-05-15
接受日期: 2009-05-21
在线出版日期: 2009-06-18
修回日期: 2009-05-15
接受日期: 2009-05-21
在线出版日期: 2009-06-18
Abstract
目的: 克隆幽门螺杆菌(H pylori)γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase, GGT)基因, 实现GGT基因在大肠杆菌中的表达.
方法: 从胃癌患者胃黏膜组织中分离培养获得H pylori, 提取其基因组DNA, 对GGT基因进行PCR扩增, 克隆进pMD18-T载体, 酶切和测序验证, 构建原核表达载体 pET-28a(+)-GGT, 转化大肠杆菌BL21, 经IPTG诱导表达重组融合蛋白, SDS-PAGE及Western blot分析检测表达产物.
结果: 成功克隆了GGT基因, 经酶切和测序验证正确, 成功构建了pET-28a(+)-GGT质粒, 高效表达出了68 kDa的融合蛋白.
结论: 在大肠杆菌中成功表达了GGT重组融合蛋白, 为进一步研究GGT与线粒体介导的细胞凋亡之间的关系奠定了基础.
Keywords: 幽门螺杆菌; γ-谷氨酰转肽酶; 克隆; 原核表达