基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-06-18; 17(17): 1707-1712
Published online 2009-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i17.1707
MT1E在肝癌形成过程中的表达及其在肝癌细胞中的作用
管冬元, 方肇勤, 代小平, 梁超, 胡卫, 吴中华, 高必峰
管冬元, 方肇勤, 代小平, 梁超, 胡卫, 吴中华, 上海中医药大学基础医学院 上海市 201203
高必峰, 科罗拉多大学医学院 美国科罗拉多州 80220
管冬元, 博士, 副教授, 主要从事中医药防治肿瘤的分子机制研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30271576; No. 30400582; No. 30672574.
作者贡献分布: 此文主要由方肇勤与管冬元设计、实验、分析及撰写; 课题由方肇勤与管冬元设计并提供研究经费; 代小平、梁超及胡卫承担了大部分的实验工作; 吴中华参与了部分实验及辅助研究工作; 高必峰主要参与基因芯片及其数据分析; 论文写作由管冬元与方肇勤完成.
通讯作者: 方肇勤, 201203, 上海市蔡伦路1200号, 上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室. zqfang@sh163d.sta.net.cn
电话: 021-51322115
收稿日期: 2009-03-30
修回日期: 2009-05-09
接受日期: 2009-05-18
在线出版日期: 2009-06-18
Abstract

目的: 探讨MT1E基因在肝癌形成过程中不同阶段的表达及其在肝癌细胞中的生物学功能.

方法: DEN诱发大鼠肝癌形成模型, 分别观察造模4、8、16、20 wk后肝脏组织病理形态学的改变以及MT1E基因表达的差异; 针对MT1E基因mRNA序列设计2个siRNA靶点, 分别经质粒重组后电转入SMMC-7721肝癌细胞株中, 实时荧光定量PCR检测MT1E基因的表达, MTT法检测细胞生长增殖.

结果: 大鼠肝癌造模4、8 wk时肝组织主要表现为炎性病变, 而到16 wk后呈现典型的增生病变, 20 wk后已全部发展为肝细胞癌. MT1E基因在造模16 wk后表达明显增加, 与对照组比较差异显著(芯片读数: 11524 vs 5462). 成功筛选到MT1E基因RNA干扰的一个有效靶序列, 电转染72 h后该基因的表达量较空白对照组与阴性对照组明显降低(0.38 vs 1.00, 0.93, P<0.01). 与阴性对照组比较, 有效干扰靶点电转染144 h后细胞的生长增殖得到了明显抑制(0.1700±0.0313 vs 0.5748±0.0480, P<0.01).

结论: 成功应用DEN诱发大鼠肝癌形成, MT1E基因在肝癌形成的后期表达明显升高, 其高表达与肿瘤细胞的恶性增殖有关.

Keywords: 金属硫蛋白1E; 基因表达; 生物芯片; 肝癌; RNA干扰