基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-05-28; 17(15): 1489-1492
Published online 2009-05-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i15.1489
人STIM1基因真核表达载体的构建及其在肝细胞中的表达
张振亚, 张宗明, 潘丽洁
张振亚, 张宗明, 潘丽洁, 清华大学医学院 清华大学第一附属医院消化中心普外科 北京市 100016
张振亚, 2006年级清华大学医学院博士, 主要从事细胞离子通道与肝胆外科疾病的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30270532, No. 30670774; 清华-裕元医学科学研究基金资助项目, No. 20240000531, No. 20240000547.
作者贡献分布: 张宗明设计课题、指导实验研究; 张振亚参与设计课题、主要完成实验研究; 潘丽洁完成部分实验研究; 张振亚与张宗明撰写论文.
通讯作者: 张宗明, 教授, 100016, 北京市朝阳区酒仙桥一街坊6号, 清华大学第一附属医院消化中心普外科. zhangzongming@mail.tsinghua.edu.cn
电话: 010-64372362
收稿日期: 2009-03-04
修回日期: 2009-04-15
接受日期: 2009-04-20
在线出版日期: 2009-05-28
Abstract

目的: 构建人STIM1基因真核表达载体, 并观察其在人肝细胞株(HL-7702)中的表达. 

方法: 提取HL-7702细胞总RNA, RT-PCR扩增, 经纯化回收后将片段克隆至pGM-T载体, 酶切琼脂糖凝胶电泳分析鉴定并测序, 最后用重组质粒转染HL-7702细胞, 通过PCR-电泳和Western blot法检测STIM1基因的表达. 

结果: PCR扩增的片段长度为342 bp, 测序结果以及重组质粒pGM-T-STIM1的酶切琼脂糖凝胶电泳鉴定结果均证明STIM1基因成功克隆到真核表达载体中. PCR-电泳和Western blot实验结果分别显示转染重组质粒后的HL-7702细胞在基因与蛋白水平表达STIM1均有所增强.

结论: 成功构建了人STIM1基因的真核表达载体pGM-T-STIM1, 并在人肝细胞株HL-7702中稳定表达, 为研究STIM1蛋白在人肝细胞内Ca2+浓度调控方面及其对人肝细胞分泌功能的影响奠定了良好的实验基础.

Keywords: STIM1; 真核表达载体; 人肝细胞株HL- 7702; 基因表达