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应用实时荧光定量RT-PCR法建立肝癌分子诊断指数
王伟丽, 天津医科大学第三中心临床学院 天津市 300170
高英堂, 杜智, 王毅军, 景丽, 郭华, 杨斌, 白同, 天津市第三中心医院 天津市人工细胞重点实验室 天津市 300170
王伟丽, 天津医科大学硕士, 主要从事多种医学分子技术在肝癌临床诊断治疗中的应用研究.
基金项目: 天津市科委攻关基金资助项目, No. 05YFSZSF02500.
作者贡献分布: 此课题的设计与论文写作由王伟丽与高英堂完成; 研究过程由王伟丽、郭华和景丽完成; 标本采集由杜智、王毅军及白同完成; 数据分析由王伟丽、高英堂及杨斌完成.
通讯作者: 高英堂, 300170, 天津市河东区津塘路83号, 天津市第三中心医院. gaoyt816@163.com
电话: 022-84112148 传真: 022-24382234
收稿日期: 2009-02-03
修回日期: 2009-02-20
接受日期: 2009-02-23
在线出版日期: 2009-04-08
修回日期: 2009-02-20
接受日期: 2009-02-23
在线出版日期: 2009-04-08
Abstract
目的: 筛选肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中表达水平较正常肝细胞差异大、特异性好的基因, 建立肝癌分子诊断指数, 以期从分子病因学角度实现对肝癌的早期诊断.
方法: 随机选择38例手术切除组织标本, 其中正常肝5例、肝炎4例、肝硬化(LC)12例、HCC和癌旁组织17例, 实时荧光定量RT-PCR检测9个基因的表达, 以管家基因G3PDH为对照, 2-△△CT法计算目的基因相对表达量, 依据表达异常的基因个数建立分子诊断指数.
结果: GPC3等6个基因在正常肝、肝炎、LC与HCC组的两组或多组间存在差异(P<0.05); GPC3、E2F1从肝炎组到LC、HCC组呈递增趋势, HGF、CLDN10在LC组表达量升高, 而在HCC组明显下降, PTEN、PRDM2、MGMT从肝炎组到LC、HCC组呈递减趋势; 9个基因在LC组分子诊断指数平均值为1.58, 在HCC组平均值为5.24, 二者差异显著; GPC3、E2F1、MMP2从癌旁到癌呈递增趋势, CLDN10、HGF、PTEN、DLC1、PRDM2、MGMT从癌旁到癌呈递减趋势.
结论: 通过筛选更多基因的组合分析, 分子诊断指数有望成为鉴别诊断早期肝癌的一种有效方法.
Keywords: 肝细胞癌; 基因; 表达; 实时荧光定量RT-PCR; 分子诊断指数