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罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定
千年松, 李韧, 于衡超, 张福琴, 窦科峰, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆外科 陕西省西安市 710033
曹云新, 中国人民解放军第四军医大学基础医学部免疫学教研室 陕西省西安市 710032
千年松, 2005年中国人民解放军第四军医大学本科, 主要从事肝脏肿瘤的基础研究.
作者贡献分布: 千年松与窦科峰对此文所作贡献均等; 此课题由千年松, 李韧, 于衡超, 曹云新, 张福琴及窦科峰设计; 研究过程由千年松, 李韧, 于衡超, 曹云新及张福琴操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由曹云新提供; 数据分析由千年松, 李 韧, 于衡超完成; 本论文写作由千年松, 李韧, 于衡超完成.
通讯作者: 窦科峰, 710033, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆外科. doukf@fmmu.edu.cn
电话: 029-84771094
收稿日期: 2007-08-23
修回日期: 2008-02-28
接受日期: 2008-03-08
在线出版日期: 2008-03-28
修回日期: 2008-02-28
接受日期: 2008-03-08
在线出版日期: 2008-03-28
Abstract
目的: 建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法, 并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.
方法: 利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料, 分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群, 再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法, 以比较不同肝癌细胞亚群的
差异.
结果: 根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群, 2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50% vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P<0.01), Rholow亚群是具有干细胞特性的.
结论: Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群, 同时进一步证实肝癌的异质性.
Keywords: 肝细胞癌; 异质性; 罗丹明123; 肿瘤干细胞; 流式细胞分选术