Copyright
©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
ERβ重组质粒的构建及其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达
翟荣林, 王国斌, 蔡开琳, 许飞, 田元, 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科 湖北省武汉市 430022
翟荣林, 华中科技大学同济医学院在读博士, 主要从事胃肠道肿瘤的表观遗传学发病机制研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助课题资助项目, No. 30500488.
作者贡献分布: 本课题翟荣林, 王国斌, 蔡开琳设计; 研究过程由翟荣林, 王国斌, 蔡开琳, 许飞及田元操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由许飞, 田元提供; 数据分析由翟荣林, 蔡开琳完成; 本论文写作由翟荣林, 王国斌及蔡开琳完成.
通讯作者: 蔡开琳, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科. caikailin@yahoo.com.cn
电话: 027-85351619
收稿日期: 2007-11-16
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-22
在线出版日期: 2008-03-08
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-22
在线出版日期: 2008-03-08
Abstract
目的: 基因重组技术构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并检测其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达.
方法: 应用RT-PCR从人结肠癌手术患者正常切缘组织中分离、扩增目的基因片段, 将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-C1中, 采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列; 脂质体介导重组质粒pEGFP-C1-ERβ瞬时转染Caco-2并上流式细胞仪分选, 获得比较单一的转染细胞; 分别采用RT-PCR、Western blot检测转染前后ERβ基因不同分子水平表达.
结果: 酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ构建无误; RT-PCR和Western blot分析均表明, 与转染空质粒pEGFP-C1组和空白对照组细胞相比, 转染重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ组细胞ERβ基因表达水平明显提高.
结论: 成功构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并在Caco-2细胞株中表达, 为进一步研究ERβ如何通过雌激素受体通路调控下游靶基因表达和参与结肠癌表遗传学发生机制奠定了基础.
Keywords: 雌激素受体β; 基因重组; 真核表达载体; 结肠癌