Copyright
©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
新型核苷类似物β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用及其机制
李岩, 林菊生, 张颖慧, 王晓燕, 何星星, 汪鸿, 高玲玲, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 湖北省武汉市 430030
李岩, 湖北省武汉市同济医院消化内科博士, 主要从事肝脏病学的研究.
基金项目: 国家自然科学基金重点资助项目, No. 30330680.
作者贡献分布: 本课题由林菊生, 李岩, 张颖慧, 王晓燕, 何星星, 汪鸿, 高玲玲设计; 研究过程中酶的提纯由李岩, 张颖慧共同完成, 药物实验部分由李岩操作完成; 数据分析由李岩, 王晓燕完成; 本论文写作由李岩, 林菊生, 张颖慧完成.
通讯作者: 林菊生, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所. fengshuwenliyan@yanhoo.com.cn
电话: 027-83663661 传真: 027-83663661
收稿日期: 2007-12-11
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-25
在线出版日期: 2008-02-28
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-25
在线出版日期: 2008-02-28
Abstract
目的: 对人DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定, 通过检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用, 观察β-L-D4A的毒副作用.
方法: 运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ; 检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学作用.
结果: 提纯并鉴定了DNA聚合酶δ, 收得率是15%, 比活力是1911 Ukat/mg. β-L-D4A为抑制剂时, 对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学参数分别是Km = 1.86 μmol/L, 2.45 μmol/L, IC50 = 25.21 μmol/L和150.1 μmol/L, Ki = 24.03 μmol/L和132.7 μmol/L, 结果均提示β-L-D4A对DNA聚合酶β和δ的抑制作用远小于拉米夫定.
结论: β-L-D4A是人DNA聚合酶β和δ的竞争性抑制剂, 他对这两种酶的毒副作用远小于拉米夫定, 可望成为更高效低毒的抗HBV类药物.
Keywords: 核苷类; β-L-D4A; 人DNA聚合酶β和δ; 酶动力; 毒副作用