基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-02-28; 16(6): 602-606
Published online 2008-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i6.602
PRL-3真核绿色荧光蛋白表达载体的构建及其在结肠癌SW480细胞中的表达
柳玉红, 李建明, 周军, 丁彦青
柳玉红, 李建明, 周军, 丁彦青, 南方医科大学南方医院病理科, 南方医科大学基础医学院病理学教研室, 广东省分子肿瘤病理重点实验室, 教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室 广东省广州市 510515
柳玉红, 南方医科大学在读博士研究生, 主要从事肿瘤病理的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30500241, No. 30670968, No. 30700286.
作者贡献分布: 柳玉红与周军对此文所作贡献均等; 此课题由柳玉红, 李建明, 周军, 丁彦青设计; 研究过程由柳玉红及周军操作完成; 数据分析由柳玉红及李建明完成; 本论文写作由柳玉红及李建明完成.
通讯作者: 李建明, 510515, 广东省广州市, 南方医科大学南方医院病理科, 南方医科大学基础医学院病理学教研室, 广东省分子肿瘤病理重点实验室, 教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室. lixinyue@fimmu.com
电话: 020-62789362
收稿日期: 2007-10-16
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-25
在线出版日期: 2008-02-28
Abstract

目的: 构建蛋白酪氨酸磷酸酶-3(PRL-3)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-PRL-3, 为PRL-3基因功能研究奠定基础. 

方法:  设计人PRL-3特异性引物, 提取人大肠癌细胞系SW620细胞总RNA, 应用RT-PCR方法获取人PRL-3全长cDNA, 分别克隆至T载体及真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1, 应用PCR、酶切及DNA测序进行鉴定, 确认后转染大肠癌细胞SW480, 应用G418进行筛选获取PRL-3稳定表达细胞克隆, 应用荧光定量PCR检测PRL-3基因表达. 

结果: 获得522 bp的PRL-3基因编码序列并成功构建了真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-PRL-3, 该重组载体能够在SW480细胞中稳定表达.

结论:  成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-PRL-3和建立PRL-3稳定表达SW480细胞, 为进一步深入研究PRL-3基因在大肠癌发生发展中的作用奠定基础.

Keywords: 蛋白酪氨酸磷酸酶-3; 真核表达; 绿色荧光蛋白; 稳定转染