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不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导类肝细胞的影响
何文艳, 姜慧卿, 河北医科大学第二医院消化科 河北省石家庄市 050000
何文艳, 中国石油中心医院感染科 河北省廊坊市 065000
姜慧卿, 河北医科大学第二医院消化科 河北省石家庄市 050000
何文艳, 硕士, 主治医师, 主要从事肝病及传染病研究.
基金项目: 河北省卫生厅科研课题, No. 062761355.
作者贡献分布: 本论文由姜慧卿指导; 刘树贤设计; 何文艳操作完成并撰写论文; 姜慧卿、刘树贤审阅.
通讯作者: 姜慧卿, 050000, 河北省石家庄市和平西路215号, 河北医科大学第二医院消化科. huiqingjiang@yahoo.com.cn
电话: 0311-66002955
收稿日期: 2007-10-17
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-22
在线出版日期: 2008-02-18
修回日期: 2008-01-15
接受日期: 2008-01-22
在线出版日期: 2008-02-18
Abstract
目的: 探讨实验性大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外培养、诱导的最优条件, 为MSCs治疗临床重症肝病患者提供参考依据.
方法: 采用密度梯度离心法和贴壁法分离大鼠MSCs, 经培养传代获得纯化的MSCs. 采用析因实验, 设不同诱导时间、不同浓度的FBS、不同浓度的细胞因子为3个因素, 每个因素设不同水平, 对纯化的MSCs进行分组诱导培养. 留取15、21、27 d细胞培养液进行白蛋白(Alb)、甲胎蛋白(AFP)检测; 于27 d时收集细胞爬片, 采用过碘酸希夫(PAS)实验进行糖原染色和免疫细胞化学染色检测MSCs中CK-18和CK-19.
结果: 诱导15、21、27 d, 各MSCs诱导组AFP水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01), 21 d诱导组AFP水平最高; 15 d各MSCs诱导组与MSCs非诱导组白蛋白水平无统计学意义, 21、27 d各MSCs诱导组白蛋白水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01), 27 d诱导组白蛋白水平最高. 27 d各MSCs诱导组糖原染色阳性, 免疫细胞化学染色CK-18、CK-19均阳性, 而MSCs非诱导组糖原染色、CK-18、CK-19均阴性. 多因素方差分析表明, MSCs体外最佳诱导条件为含200 mL/L FBS的DMEM+肝细胞生长因子(HGF)20 μg/L+成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)20 μg/L.
结论: HGF和FGF-4可在体外诱导实验性大鼠MSCs分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞; 不同浓度的FBS、HGF和FGF-4影响MSCs的体外分化; MSCs可作为治疗临床重症肝病的一种细胞来源.
Keywords: 骨髓; 间充质干细胞; 类肝细胞; 肝细胞生长因子; 成纤维细胞生长因子-4