基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-12-18; 16(35): 3941-3945
Published online 2008-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i35.3941
短发夹RNA对胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的影响
李冬斌, 郑志刚, 许香梅, 郭华, 赵雪莲, 黄林凤, 蔡建辉
李冬斌, 蔡建辉, 河北医科大学第二医院胃肠外科 河北省石家庄市 050000
郑志刚, 许香梅, 河北省石家庄市第一医院 河北省石家庄市 050011
赵雪莲, 河北医科大学第二医院整形外科 河北省石家庄市 050000
黄林凤, 河北衡水市第三人民医院 河北省衡水市 053100
郭华, 河北省石家庄市中心医院 河北省石家庄市 050011
李冬斌, 2004年河北医科大学硕士, 主治医师, 主要从事消化系统肿瘤的临床研究与治疗.
作者贡献分布: 课题由蔡建辉设计; 李冬斌与郑志刚操作完成并撰写论文; 许香梅与郭华参与裸鼠的饲养及成瘤实验及部分实验数据的统计分析; 赵雪莲与黄林凤负责参与部分标本的收集.
通讯作者: 蔡建辉, 050000, 河北省石家庄市和平西路215号, 河北医科大学第二医院胃肠外科. jianhuicai2001@163.com
电话: 0311-66002983
收稿日期: 2008-08-13
修回日期: 2008-11-03
接受日期: 2008-11-10
在线出版日期: 2008-12-18
Abstract

目的: 研究短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)对人胰腺癌细胞PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用.

方法: 构建特异性针对胰腺癌PANC-1细胞突变型K-ras基因的重组质粒pGensil-1-P1, 阴性对照质粒pGensil-1-HK并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞. 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测K-ras基因mRNA和蛋白的表达, CCK-8方法测量细胞生长曲线. 并建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠皮下移植瘤模型, 分别注射Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK质粒, 动态观察并处死裸鼠计算肿瘤体积.

结果: 测序证实质粒表达载体构建成功, 短发夹RNA(shRNA)使胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因的mRNA较未治疗组、阴性对照组相比明显减少(P = 0.01); 未治疗组、阴性对照组及治疗组的K-ras蛋白表达率分别为100%, 99.0%±0.73%, 39.9%±2.1%, 前两组K-ras蛋白表达差异无统计学意义, 治疗组较未治疗组K-ras蛋白表达下调了约60.1%; 细胞生长受到明显抑制(P = 0.02); 经重组质粒治疗14 d后, 裸鼠皮下移植瘤生长缓慢, 相较于对照组瘤体明显缩小(P = 0.03).

结论: shRNA对特异性转染组的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用, 使细胞以及裸鼠移植瘤的生长受到抑制.

Keywords: 胰腺癌; K-ras; RNA干扰; 短发夹RNA