基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-12-18; 16(35): 3937-3940
Published online 2008-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i35.3937
pEGFP-restin重组质粒的构建及其在BGC-803胃癌细胞中的表达
戴聪, 李锦毅
戴聪, 辽宁医学院研究生院 辽宁省锦州市 121001
李锦毅, 武警总医院临床教研室 北京市 100039
戴聪, 硕士, 住院医师, 主要从事消化系统肿瘤分子机制的研究工作.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30672771.
作者贡献分布: 本课题由戴聪与李锦毅设计; 研究过程由戴聪操作完成; 研究所用新试剂及工具由李锦毅提供; 数据分析与论文写作由戴聪完成.
通讯作者: 李锦毅, 100039, 北京市海淀区永定路69号, 武警总医院临床教研室. lijinyi.li@vip.sina.com
电话: 010-88276846
收稿日期: 2008-11-19
修回日期: 2008-12-05
接受日期: 2008-12-08
在线出版日期: 2008-12-18
Abstract

目的: 构建一种含人肿瘤休眠蛋白基因(restin)的质粒, 以绿色荧光蛋白作为报告基因, 观察其在胃癌细胞中的表达, 为探讨其抗肿瘤作用的分子机制打下基础.

方法: 从人胚肾组织中, 以RT-PCR方法扩增restin基因片段, 将restin片段和增强型绿色荧光表达质粒pEGFP-C1酶切、纯化、连接、转化、筛选, 构建pEGFP-restin重组质粒, 转染胃癌细胞, 荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达, 并对表达产物进行Western blot鉴定.

结果: RT-PCR产物经琼脂糖电泳, 在预期位置(600 bp)处阳性条带表达; 重组载体经酶切分析, 插入片段表达restin基因; pEGFP-restin重组质粒成功转染胃癌细胞, 在荧光显微镜下强绿色荧光蛋白表达, Western blot鉴定结果显示pEGFP-restin上的restin基因在BGC-803细胞中正确表达.

结论: 成功构建了pEGFP-restin重组质粒, 为进一步研究restin的功能提供了重要的实验材料.

Keywords: 休眠基因; 绿色荧光蛋白; 质粒构建; 基因转染; 胃癌