基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-08-18; 16(23): 2599-2603
Published online 2008-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i23.2599
FCU1重组腺病毒载体构建及对结肠癌细胞的杀伤作用
吴斌文, 李友佳, 张凯军, 李东风, 曾志刚, 张瑛华, 耿庆山
吴斌文, 李友佳, 张凯军, 李东风, 曾志刚, 张瑛华, 耿庆山, 广东省人民医院东病区消化内科 广东省老年医学研究所 广东省广州市 510080
吴斌文, 2003年华中科技大学同济医学院博士, 副主任医师. 主要从事消化系肿瘤的临床和基础研究.
作者贡献分布: 此课题由耿庆山与吴斌文共同设计; 研究过程由吴斌文, 李友佳, 李东风, 张凯军及张瑛华操作完成; 数据分析由吴斌文完成; 本论文写作由吴斌文完成.
通讯作者: 吴斌文, 510080, 广东省广州市中山二路106号, 广东省人民医院东病区消化内科; 广东省老年医学研究所. wubinwengd@yahoo.com.cn
电话: 020-83827812-70511
收稿日期: 2008-07-07
修回日期: 2008-08-05
接受日期: 2008-08-10
在线出版日期: 2008-08-18
Abstract

目的: 构建含融合自杀基因FCU1的重组腺病毒载体, 转染293细胞构建重组腺病毒, 并感染结肠癌细胞, 同时给以前体药物5-FC, 观察其对结肠癌细胞的杀伤作用.

方法: 将FCU1基因采用EcoRⅠ、SalⅠ双酶切克隆至穿梭质粒pDC316, 构建质粒pDC316-FCU1, 并酶切和测序鉴定. pDC316-FCU1与骨架质粒pBHG经脂质体共转染HEK 293细胞, 在HEK 293细胞中同源重组并包装重组腺病毒Ad5-FCU1. 将Ad5-FCU1感染结肠癌细胞HCT116, 同时给以前体药物5-FC, MTT法检测5-FC对HCT116杀伤作用.

结果: 重组质粒pDC316-FCU1构建成功. pDC316-FCU1与骨架质粒pBHG共转染HEK 293细胞后, 出现明显的毒斑, 纯化后病毒滴度为2×1012 PFU/L. 重组病毒Ad5-FCU1感染HCT116细胞后, 给以无毒前体药物5-FC显示极强的杀伤作用, 当5-FC达100 μmol/L时, 存活的HCT116/FCU1细胞极少, 而对照组存活率接近90%.

结论: 成功构建了含融合自杀基因FCU1的Ad5-FCU1重组腺病毒, FCU1/5-FC自杀基因系统对结肠癌细胞具有显著的体外杀伤作用.

Keywords: 结肠癌; 融合自杀基因; 基因治疗