基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-08-18; 16(23): 2587-2591
Published online 2008-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i23.2587
靶向CTGF锤头核酶对TGF-β1作用下人肝星状细胞合成Ⅰ型胶原的作用
齐晓艳, 高润平, 王淑华, 张瑞娟, 包万国, 金清龙, 辛桂杰, 杨永广
齐晓艳, 高润平, 张瑞娟, 包万国, 金清龙, 辛桂杰, 吉林大学第一医院感染症科 吉林省长春市 130021
王淑华, 吉林大学第一医院激光科 吉林省长春市 130021
杨永广, 哈佛医学院马塞诸塞总院 MA 02129 USA
齐晓艳, 2008年吉林大学硕士毕业, 主要从事肝纤维化发生机制研究.
基金项目: 吉林省科技厅资助项目, No. 200505211, No. 20070729-9.
作者贡献分布: 实验研究和论文初稿齐晓艳完成; 实验设计、指导和论文定稿高润平完成; 实验设计与论文写作杨永广完成; 其他作者对实验工作给予大力协助.
通讯作者: 高润平, 130021, 吉林省长春市新民大街71号, 吉林大学第一医院感染症科. gao_runping@yahoo.com
电话: 0431-85612413
收稿日期: 2008-06-07
修回日期: 2008-07-26
接受日期: 2008-07-29
在线出版日期: 2008-08-18
Abstract

目的: 探讨靶向结缔组织生长因子(CTGF)的锤头核酶抑制TGF-β1作用下人肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(Col I)合成及其细胞周期进程的作用.

方法: 构建含有人CTGF锤头核酶cDNA序列的重组质粒pTriCTGF-Rz. 将空质粒pTriEx2和重组质粒pTriCTGF-Rz分别转染人肝星状细胞系(LX-2)细胞. 细胞分为4组: pTriEx2转染组, pTriEx2转染加TGF-β1组, pTriCTGF-Rz转染加TGF-β1组和pTriCTGF-Rz转染组. 采用半定量RT-PCR测定LX-2细胞CTGF mRNA和Col I mRNA转录水平, 采用ELISA和流式细胞仪分别用于LX-2细胞Col I分泌功能和LX-2细胞周期进程的检测.

结果: TGF-β1可明显提高LX-2细胞CTGF mRNA和Col I mRNA的转录水平及分泌Col I蛋白功能(t = 11.14, 14.36, 7.17, 均P<0.01); pTriCTGF-Rz转染LX-2细胞既能降低基础CTGF mRNA 和Col I mRNA水平及Col I蛋白水平(t = 2.86, 3.06, 2.97, 均P<0.05), 又能部分拮抗TGF-β1诱导LX-2细胞CTGF mRNA和Col I mRNA转录和Col I蛋白分泌的增加(t = 2.99, 3.09, 3.02, 均P<0.05). TGF-β1对LX-2细胞周期进程无影响.

结论: CTGF是TGF-β1作用下人肝星状细胞合成Col I的下游介导者, TGF-β1对HSC周期进程无影响, 靶向CTGF有可能成为肝纤维化基因治疗的新靶点.

Keywords: 结缔组织生长因子; TGF-β1; 人肝星状细胞; 锤头核酶; 基因治疗; 逆转录-聚合酶链反应