Published online 2008-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i22.2464
修回日期: 2008-06-27
接受日期: 2008-07-07
在线出版日期: 2008-08-08
目的: 观察不同条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为类肝细胞的差异.
方法: Wistar大鼠24只随机均分为3组, 分别为正常对照组、肝纤维化模型组、自拟中药干预组. 采用CCl4乳剂皮下注射建立肝纤维化模型. 造模成功后中药干预组采用丹金舒肝胶囊药液灌胃治疗. 治疗结束后剖杀大鼠, 留取大鼠肝脏标本, HE染色观察各组病理改变. 采用密度梯度离心法和贴壁法分离各组大鼠的MSCs, 经培养传代获得纯化的MSCs. 各组纯化的MSCs采用HGF、FGF-4进行诱导培养. 留取15、21、27 d细胞培养液进行白蛋白(Alb)、甲胎蛋白(AFP)检测; 于27 d收集细胞爬片, 进行糖原染色和CK-18免疫细胞化学染色.
结果: 3组15、21和27 d各MSCs诱导组AFP水平均高于MSCs非诱导组(P<0.01), 其中21 d AFP水平最高(肝纤维化模型组: 48.94±0.08 vs 9.90±0.09; 中药干预组: 49.86±0.29 vs 8.69±0.62; 正常对照组: 38.65±0.33 vs 9.04±0.11, 均P<0.01); 3组15 d各MSCs诱导组与MSCs非诱导组白蛋白水平无统计学意义; 21 d、27 d各MSCs诱导组白蛋白水平均高于MSCs非诱导组(1.11±0.08 vs 0.32±0.00, 1.25±0.04 vs 0.32±0.00, 1.06±0.03 vs 0.33±0.00; 1.52±0.02 vs 0.33±0.00, 1.79±0.01 vs 0.31±0.03, 1.63±0.04 vs 0.32±0.01, 均P<0.01), 27 d最高. 27 d各MSCs诱导组糖原染色阳性, 免疫细胞化学染色CK-18均阳性, 而MSCs非诱导组糖原染色、CK-18均阴性.从AFP、Alb水平综合比较, 3组诱导效果发现自拟中药干预组优于其他2组.
结论: HGF、FGF-4可在体外诱导实验性大鼠的MSCs分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞; 自体MSCs可以作为治疗临床重症肝病的一种细胞来源, 而临床联合中药复方治疗可能会使MSCs体外诱导的效果更为理想.