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世界华人消化杂志. 2008-08-08; 16(22): 2458-2463
Published online 2008-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i22.2458
Published online 2008-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i22.2458
hHGF转染HepG2细胞后基因表达谱差异筛选
张维燕, 张锦前, 李晓光, 成军, 李国力, 王琦, 张晨宇, 王晓春, 柴艳云, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
张维燕, 2006年北京大学医学部硕士, 主治医师, 主要从事肝脏疾病合并糖尿病的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600524; 北京市卫生局资助项目, No. 2004-局-051.
作者贡献分布: 此课题由张锦前设计; 研究过程由张维燕, 张锦前, 李晓光, 成军, 李国力, 王琦, 张晨宇, 王晓春及柴艳云操作完成; 数据分析由张维燕, 张锦前及李晓光完成; 本论文写作由张维燕, 张锦前及成军完成.
通讯作者: 张锦前, 100011, 北京市东城区安定门外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. jingwanghou@yahoo.com.cn
电话: 010-64200407
收稿日期: 2008-05-12
修回日期: 2008-06-15
接受日期: 2008-06-17
在线出版日期: 2008-08-08
修回日期: 2008-06-15
接受日期: 2008-06-17
在线出版日期: 2008-08-08
Abstract
目的: 构建hHGF真核表达载体, 并在HepG2细胞中表达, 筛选其对HepG2细胞的差异表达基因.
方法: 构建pcDNA3.1(-)-hHGF载体, 测序鉴定; 转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测; 运用基因表达谱芯片技术, 筛选pcDNA3.1(-)-hHGF和pcDNA3.1(-)载体分别转染HepG2细胞后, 提取mRNA并逆转录为cDNA, 经表达谱芯片分析差异表达基因.
结果: 构建的表达载体经酶切和测序确定; 转染HepG2细胞后hHGF表达经蛋白免疫印迹证实; 经20000个基因的表达谱芯片分析发现, 其中有430个基因表达水平显著上调, 88个基因表达水平显著下调.
结论: 筛选出HGF转染HepG2细胞后的差异表达基因, 对其在肝细胞中多种作用机制研究提供了重要依据.
Keywords: 人肝细胞生长因子; HepG2细胞; 差异基因