基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-07-28; 16(21): 2343-2348
Published online 2008-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i21.2343
人肝癌细胞系HepG2与HepG2.2.15差异HLA结合肽的分离与鉴定
陈黎, 谢兴旺, 张恒辉, 费然, 丛旭, 魏来, 陈红松
陈黎, 谢兴旺, 张恒辉, 费然, 丛旭, 魏来, 陈红松, 北京大学人民医院肝病研究所 北京市 100044
陈黎, 北京大学医学部内科学硕士, 主要从事乙型肝炎病毒感染相关HLA结合肽的研究.
基金项目: 新世纪优秀人才支持计划资助项目, No. 985-2-099-113; 国家重点基础研究(973)计划资助项目, No. 2007CB512906.
作者贡献分布: 此课题由陈黎, 陈红松, 谢兴旺及张恒辉设计; 研究过程由陈黎, 张恒辉及费然操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由费然与丛旭提供; 数据分析由陈黎, 谢兴旺, 张恒辉及陈红松完成; 本论文写作由陈黎, 谢兴旺及张恒辉完成, 并由陈红松与魏来修改.
通讯作者: 陈红松, 100044, 北京市西直门南大街11号, 北京大学人民医院肝病研究所. chen2999@sohu.com
电话: 010-88325726 传真: 010-68318386
收稿日期: 2008-05-03
修回日期: 2008-06-16
接受日期: 2008-06-17
在线出版日期: 2008-07-28
Abstract

目的: 分离并鉴定整合表达HBV的人肝癌细胞系HepG2.2.15及其母细胞系HepG2的差异HLAⅠ类分子结合肽, 寻找与HBV感染相关的HLA结合肽.

方法: 洗涤法得到HepG2和HepG2.2.15细胞表面的HLAⅠ类分子及与其结合的肽段. 效液相色谱(HPLC)对两种细胞的洗脱肽段进行分离和图谱比较, 挑选出HepG2.2.15特有的峰段进行纳升电喷雾串联质谱(nanoESI-MS/MS)分析, 结合MASCOT数据库检索和从头测序, 分析多肽的序列和来源. 后采用RT-PCR法进行mRNA表达检测.

结果: HPLC对比显示HepG2和HepG2.2.15的HLA结合肽存在显著差异. 利用nanoESI-MS/MS技术从HPLC差异峰段中分离鉴定出一条来源于已知蛋白人烯醇酶-1(enolase1, ENO1)的多肽SPDDPSRYISPDQ. RT-PCR结果显示, ENO1在HepG2和HepG2.2.15细胞中均有表达, 且在HepG2.2.15细胞中表达明显高于HepG2细胞.

结论: 来自ENO1的多肽SPDDPSRYISPDQ能够被HLAⅠ类分子提呈到HepG2.2.15细胞表面, 且ENO1 mRNA在HepG2.2.15细胞中的表达显著高于HepG2细胞. 提示HBV感染可能引起ENO1表达上调.

Keywords: HepG2细胞; HepG2.2.15细胞; 乙型肝炎病毒; 烯醇酶-1; 高效液相色谱; 质谱