基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-07-18; 16(20): 2217-2223
Published online 2008-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i20.2217
小鼠骨髓基质干细胞体外转化为肝细胞最佳诱导体系的筛选及验证
施晓雷, 毛谅, 许碧云, 谢婷, 朱章华, 陈军浩, 李雷, 丁义涛
施晓雷, 毛谅, 谢婷, 朱章华, 丁义涛, 南京大学医学院附属南京鼓楼医院肝胆外科 江苏省南京市 210008
许碧云, 陈军浩, 李雷, 南京大学医学院附属南京鼓楼医院科研部 江苏省南京市 210008
施晓雷, 南京大学医学博士, 主治医师, 主要从事干细胞移植治疗肝功能衰竭的治疗.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30371391; 江苏省自然科学基金资助项目, No. BK2003008.
作者贡献分布: 此课题由施晓雷, 毛谅, 许碧云, 谢婷, 朱章华及丁义涛设计; 研究过程由施晓雷, 许碧云, 谢婷, 朱章华, 陈军浩及李雷操作完成; 数据分析由施晓雷与毛谅完成; 本论文写作由施晓雷, 毛谅及丁义涛完成.
通讯作者: 丁义涛, 210008, 江苏省南京市, 南京大学医学院附属南京鼓楼医院肝胆外科. yitaoding@hotmail.com
电话: 025-83304616-66866 传真: 025-83317016
收稿日期: 2008-03-24
修回日期: 2008-05-07
接受日期: 2008-05-12
在线出版日期: 2008-07-18
Abstract

目的: 采用均匀设计法筛选及验证小鼠骨髓基质干细胞体外转化为肝细胞的最佳诱导培养体系.

方法: 获取小鼠骨髓基质干细胞, 根据均匀设计法分8组进行体外诱导实验. 通过流式细胞术检测各组ALB及CK18的阳性表达率, 通过逐步回归分析法确立最佳细胞因子组合及浓度. 从基因水平、蛋白水平以及细胞合成代谢功能检测, 证实诱导的细胞为有功能的肝细胞.

结果: FGF取35 μg/L, OSM取30 μg/L时, ALB及CK18的阳性细胞达到最高值. 采用该最佳诱导体系诱导过程中可检测到细胞表达ALB mRNA、CK18 mRNA、AFP mRNA、TTR mRNA; 以及ALB、CK18蛋白表达; 第21天最佳体系诱导组ALB阳性细胞的比例为82.83%±9.03%, CK18阳性细胞的比例为74.79%±8.41%. 诱导培养过程中细胞分泌尿素及白蛋白, 且随诱导时间的延长而增强.

结论: 均匀设计法可有效进行最佳诱导体系的筛选, 以35 μg/L FGF、30 μg/L OSM为主的诱导培养体系, 可以有效地促进骨髓基质干细胞体外定向转化为有功能的肝细胞.

Keywords: 骨髓基质干细胞; 肝细胞; 分化; 均匀设计