Copyright
©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2008-06-28; 16(18): 1974-1979
Published online 2008-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i18.1974
Published online 2008-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i18.1974
不同培养条件对人胚胎肝细胞形态和表型的影响
李建听, 长治医学院附属和平医院肾内科 山西省长治市 046000
兰延莉, 长治医学院附属和平医院药剂科 山西省长治市 046000
李建听, 博士, 主治医师, 主要从事慢性肾衰竭血液透析及心血管并发症的研究.
作者贡献分布: 李建听与兰延莉对此文所作贡献均等; 此课题由李建听及兰延莉共同设计; 研究过程也由李建听与兰延莉共同操作完成; 研究所用试剂及分析工具由李建听提供; 数据分析由李建听与兰延莉完成; 本论文写作由李建听完成.
通讯作者: 李建听, 046000, 山西省长治市, 长治医学院附属和平医院肾内科. ljt2042@yahoo.com.cn
电话: 0355-3128406
收稿日期: 2007-11-06
修回日期: 2008-06-03
接受日期: 2008-06-14
在线出版日期: 2008-06-28
修回日期: 2008-06-03
接受日期: 2008-06-14
在线出版日期: 2008-06-28
Abstract
目的: 探讨适宜的人胚胎肝细胞培养条件.
方法: 采用胶原酶两步灌流法分离20-24 wk人胚胎肝细胞, 非连续性Percoll密度梯度离心法纯化细胞, 用Ham's F12普通培养基和条件培养基培养胚胎肝细胞. 观察培养细胞的形态特征, 免疫荧光法检测胚胎肝细胞角蛋白18 (Cytokeratin 18, CK18)和甲胎蛋白(alpha-1-fetoprotein, AFP)表达, MTT法检测细胞活力和增殖能力.
结果: 在条件培养基培养不同时间的胚胎肝细胞始终呈现特异性多角形形态, 100%表达CK18和AFP, 细胞增殖活跃, 活力无明显下降. 而在普通培养基培养24 h时, 部分细胞即呈现成纤维细胞梭样形态, 仅56%细胞表达CK18, 43%细胞表达AFP, 在培养72 h细胞均呈现成纤维细胞梭样形态, 细胞增殖及活力下降(0.25±0.03 vs 1.01±0.12, P<0.001), 至培养第7天细胞CK18及AFP表达呈阴性, 细胞增殖及活力显著下降(0.17±0.04 vs 0.94±0.12, P<0.001).
结论: Ham's F12条件培养基体外能够显著促进人胚胎肝细胞增殖, 维持胚胎肝细胞的特异性形态和表型的稳定.
Keywords: 胚胎; 肝细胞; 表型; 细胞增殖