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世界华人消化杂志. 2008-06-08; 16(16): 1751-1756
Published online 2008-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i16.1751
Published online 2008-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i16.1751
主动外排泵外膜蛋白编码基因hefA在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用
刘志强, 郑鹏远, 郑州大学第二附属医院消化内科 河南省郑州市 450014
刘志强, 在读硕士, 主要从事消化系统疾病的研究.
基金项目: 河南省杰出青年基金资助项目, No. 074100510017; 河南省高校创新人才基金计划资助项目, No. 2005.
作者贡献分布: 刘志强与郑鹏远对此文所作贡献均等; 此课题由郑鹏远与刘志强设计; 研究过程由郑鹏远与刘志强操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由郑鹏远提供; 数据分析由刘志强完成; 本论文写作由刘志强与郑鹏远完成.
通讯作者: 郑鹏远, 450014, 河南省郑州市, 河南省郑州大学第二附属医院消化内科. medp7123@yahoo.com
电话: 0371-65261035
收稿日期: 2007-12-10
修回日期: 2008-04-08
接受日期: 2008-05-16
在线出版日期: 2008-06-08
修回日期: 2008-04-08
接受日期: 2008-05-16
在线出版日期: 2008-06-08
Abstract
目的: 研究幽门螺杆菌(H. pylori)分离株的多重耐药机制.
方法: 用氯霉素对临床分离株H. pylori和标准株H. pylori进行体外诱导, 琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性, 从而筛选出多重耐药株; 实时定量PCR检测多重耐药株和敏感株中编码主动外排泵外膜蛋白的结构基因hefA的mRNA水平. 通过构建hefA基因敲除株, 测定敲除前后菌株对10种抗生素的敏感性. PCR扩增20株H. pylori临床分离株主动外排泵结构基因hefA和hefC.
结果: 经氯霉素诱导后, 筛选出的耐药菌株均表现出相似的多重耐药性, 6株多重耐药株hefA基因mRNA水平显著高于敏感株(5.8466±2.9370 vs 2.6356±1.7245, P = 0.033); 成功构建了hefA基因敲除株(△HpLZ1026), △HpLZ1026对4种抗生素的敏感性明显增加; 所有20株临床分离株中均检测出hefA和hefC基因, 未发现hefABC基因缺失株.
结论: 主动外排系统hefA基因高表达导致体外人工诱导H. pylori多重耐药的产生; hefABC基因在H. pylori中普遍存在, 且在H. pylori多药耐药机制中起重要作用.
Keywords: 幽门螺杆菌; 多重耐药; 外排泵; 实时定量PCR; 基因敲除