基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-06-08; 16(16): 1746-1750
Published online 2008-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i16.1746
酵母双杂交技术对人胰腺cDNA文库中HBcAg结合蛋白基因的筛选
张维燕, 张锦前, 王琦, 李国力, 王晓春, 张晨宇, 杨涤, 成军
张维燕, 张锦前, 王琦, 李国力, 王晓春, 张晨宇, 杨涤, 成军, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
张维燕, 北京大学医学部硕士, 主治医师, 主要从事肝脏疾病合并糖尿病的研究.
基金项目: 国家自然科学基金项目资助项目, No. 30600524.
作者贡献分布: 此课题由张锦前设计; 研究过程由张维燕, 张锦前, 王琦, 李国力, 王晓春及张晨宇操作完成; 数据分析由张维燕, 张锦前, 王琦, 李国力, 杨涤, 王晓春及张晨宇完成; 本论文写作由张维燕、张锦前及成军完成.
通讯作者: 张锦前, 100011, 北京市东城区安定门外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. jingwanghou@yahoo.com.cn
电话: 010-64200407
收稿日期: 2008-02-13
修回日期: 2008-04-07
接受日期: 2008-05-06
在线出版日期: 2008-06-08
Abstract

目的: 应用酵母双杂交技术, 筛选人胰腺cDNA文库中与HBV核心抗原结合的蛋白的基因.

方法: 扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定, 将其转化至酵母菌Y187; 诱饵质粒pGBKT7-HBcAg转化酵母菌AH109并筛选鉴定. 应用酵母双杂交系统3进行配合, 在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基和含X-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基上进行双重筛选, 提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌DH5α, 提取质粒并测序, 对测序结果进行生物信息学分析.

结果: 人胰腺cDNA文库的构建以及pGBKT7-HBcAg质粒转化AH109酵母菌株均获成功, 并从人胰腺cDNA文库中筛选出9个与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因, 分别与以下已知的9种编码蛋白基因序列同源: 人胰脂肪酶(PNLIP)、人胆盐刺激酯酶(CEL)、人胰凝乳蛋白C(CTRC)、人胰蛋白酶原、人羧肽酶B1(CPB1)、人线粒体全基因组、人胰弹性酶2A、人辅脂肪酶(CLPS)和人核糖体蛋白(RPL10A).

结论: 筛选出的与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因主要与胰腺外分泌功能相关, HBV感染可能通过与胰腺所分泌的糖、脂类代谢相关的酶类结合, 而引发代谢性疾病.

Keywords: HBcAg; 人胰腺cDNA文库; 酵母双杂交技术