Copyright
©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2008-06-08; 16(16): 1716-1721
Published online 2008-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i16.1716
Published online 2008-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i16.1716
siRNA阻断NF-κB信号通路联合5-FU对食管鳞癌细胞凋亡的促进作用
田芳, 郑州大学基础医学院病理生理学教研室 河南省郑州市 450052
田芳, 许培荣, 刘红涛, 薛乐勋, 郑州大学细胞生物学研究室 河南省郑州市 450052
宋敏, 郑州大学第一附属医院肿瘤科 河南省郑州市 450052
田芳, 2006年郑州大学基础医学院博士, 讲师, 主要从事细胞信号转导的研究.
基金项目: 教育部"十五"211工程重点建设资助项目, No. 2002-2.
作者贡献分布: 田芳与宋敏对此文所作贡献均等; 此课题由田芳, 宋敏, 许培荣, 刘红涛及薛乐勋设计; 研究过程由田芳, 宋敏, 许培荣及刘红涛操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由许培荣提供; 数据分析由田芳, 宋敏及刘红涛完成; 本论文写作由田芳, 宋敏及薛乐勋完成.
通讯作者: 薛乐勋, 450052, 河南省郑州市大学路40号, 郑州大学细胞生物学研究室. xuelx@371.net
电话: 0371-66658332 传真: 0371-66997182
收稿日期: 2007-12-22
修回日期: 2008-04-07
接受日期: 2008-05-02
在线出版日期: 2008-06-08
修回日期: 2008-04-07
接受日期: 2008-05-02
在线出版日期: 2008-06-08
Abstract
目的: 利用RNAi技术特异性的抑制NF-κB亚单位p65的表达, 观察其对p65表达的抑制作用及联合5-FU对食管鳞癌细胞Eca109和EC9706的影响.
方法: 将终浓度为50 nmol/L的p65 siRNA转染到食管鳞癌细胞EC9706和Eca109中, 通过RT-PCR检测0、24、48和72 h时段p65 mRNA的表达水平. Western blotting法检测p65和Bcl-2蛋白表达, Annexin V/PI复染结合流式细胞仪检测细胞凋亡, 显微镜下观察p65 siRNA与5-FU单独或联合应用对食管鳞癌细胞形态学特性的影响.
结果: EC9706和Eca109细胞转染p65siRNA 24、48和72 h后, p65 mRNA的表达水平随时间的延长逐渐下调, 在72 h的阻断效率最为明显, 与0 h相比, 差异有显著性(0.12±0.01 vs 0.28±0.05, 0.1±0.01 vs 0.38±0.04, 均P<0.05), 转染72 h后, p65和Bcl-2蛋白表达水平下调. EC9706和Eca109转染p65siRNA后, 细胞凋亡指数明显升高(6.65%±0.27% vs 2.03%±0.08%, 8.03%±0.06% vs 2.66%±0.25%, 均P<0.05); p65 siRNA转染72 h后, EC9706和Eca109细胞增殖较慢; 当p65 siRNA与5-FU联合作用, 细胞增殖明显受到抑制.
结论: p65 siRNA可阻断NF-κB信号通路, 下调NF-κB下游基因中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达, 表明活化的NF-κB信号通路可成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点.
Keywords: 食管鳞癌; 核因子-κB; RNA干扰; 5-FU; Bcl-2