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世界华人消化杂志. 2008-05-18; 16(14): 1568-1572
Published online 2008-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i14.1568
Published online 2008-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i14.1568
shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的影响
童强, 舒晓刚, 卢晓明, 陈道达, 王国斌, 华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科 湖北省武汉市 430022
黎维勇, 华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科 湖北省武汉市 430022
陶凯雄, 华中科技大学同济医学院附属协和医院腔镜外科 湖北省武汉市 430022
基金项目: 湖北省科技攻关计划课题资助项目, No. 2006AA301A05.
作者贡献分布: 此课题设计由童强、舒晓刚、卢晓明及王国斌完成; 研究过程由童强、舒晓刚、卢晓明、黎维勇及陶凯雄操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由陈道达和王国斌提供; 数据分析由童强、舒晓刚及卢晓明完成; 本论文写作由童强、舒晓刚及卢晓明完成.
通讯作者: 童强, 430022, 湖北省武汉市解放大道1277号, 华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科. etongqiang@yahoo.com.cn
电话: 027-85351620
收稿日期: 2008-01-03
修回日期: 2008-04-02
接受日期: 2008-05-10
在线出版日期: 2008-05-18
修回日期: 2008-04-02
接受日期: 2008-05-10
在线出版日期: 2008-05-18
Abstract
目的: 研究shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的作用.
方法: 应用本实验室已构建并鉴定的STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3), 使用脂质体转染MKN-45细胞, 实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT3转染组3组. 通过RT-PCR和Western blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响; MTT比色法检测细胞的生长抑制率; 流式细胞仪分析MKN-45细胞周期分布. 用各组MKN-45细胞建立移植瘤裸鼠模型, 筛选转染psiRNA-H1和psiRNA-H1/STAT3的MKN-45稳定细胞株观察裸鼠移植瘤的生长情况.
结果: 成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(0.612±0.074 vs 1.937±0.043, P<0.05; 0.668±0.054 vs 2.005±0.064, P<0.01). G0/G=期细胞比例增高, 另一方面S期细胞比例降低, 细胞的增殖系数明显降低(25.42±3.48 vs 33.54±2.91, P<0.05). 移植瘤裸鼠模型显示, psiRNA-H1/STAT3组瘤体在体积上明显减小(4.47 cm3±0.18 cm3vs 13.65 cm3±5.64 cm3, P<0.05).
结论: 针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞系STAT3 mRNA和蛋白表达, 细胞增殖能力减弱, 在体内明显抑制肿瘤生长, 为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据.
Keywords: STAT3; 短发夹状RNA; 胃癌细胞; 裸鼠模型