基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-05-18; 16(14): 1507-1512
Published online 2008-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i14.1507
一组端粒相关蛋白分子的克隆
周平, 房殿春, 陈兵, 毛高平, 刘为纹, 曹传平, 步晓华, 张启杰
周平, 毛高平, 曹传平, 步晓华, 中国人民解放军空军总医院消化内科 北京市 100036
房殿春, 陈兵, 刘为纹, 中国人民解放军第三军医大学附属西南医院全军消化专科中心 重庆市 400038
张启杰, 山东淄博市中心医院消化内科 山东省淄博市 255036
周平, 2002年中国人民解放军第三军医大学博士, 副主任医师, 主要从事消化系疾病、肿瘤及内镜诊疗的研究
作者贡献分布: 本课题由房殿春、刘为纹及陈兵设计; 研究过程由周平完成; 部分实验材料由毛高平、曹传平、步晓华及张启杰提供; 写作由周平完成.
通讯作者: 周平, 100036, 北京市海淀区阜成路30号, 中国人民解放军空军总医院消化内科. zhouping4946@yahoo.com.cn
电话: 010-66928118-6232
收稿日期: 2008-02-15
修回日期: 2008-03-27
接受日期: 2008-05-10
在线出版日期: 2008-05-18
Abstract

目的: 进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制, 筛选新的端粒相关蛋白分子.

方法: 基于酵母双杂交技术原理, 采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体, 筛选cDNA文库, β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆, 对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.

结果: AH109、Y187酵母菌基因表型稳定, 无His渗漏表达. 成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT, 其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用. 从cDNA文库中筛选到Ade+、Leu+、Trp+和His+阳性克隆28个, β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade+、His+和LacZ+阳性克隆12个, 其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用, 予以弃除. 7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列, cDNA序列同源性比较最终获得6个已收录人cDNA序列, 他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.

结论: 获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制, 为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础.

Keywords: 端粒; 端粒酶; 端粒相关蛋白; 酵母双杂交技术; 肿瘤