基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-05-08; 16(13): 1378-1382
Published online 2008-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i13.1378
酵母双杂交法对HBV表面抗原主蛋白候选结合蛋白的筛选
周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅, 陈建民, 刘明, 施华秀, 张波, 董菁
周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅, 陈建民, 刘明, 施华秀, 张波, 董菁, 厦门大学附属中山医院消化内科; 厦门大学消化疾病研究所; 厦门市消化疾病中心; 福建医科大学教学医院(厦门大学附属中山医院) 福建省厦门市 361004
周飞, 福建医科大学硕士在读, 主要从事乙型肝炎病毒的基础研究.
基金项目: 厦门市首批重大疾病科研攻关资助项目, No. WKZ0501; 厦门市卫生局医学科研立项资助项目, No. WSK0506; 厦门大学引进人才科研启动基金资助项目, No. Z03109; 福建省青年科技人才创新项目福建省高校新世纪人才创新资助项目.
作者贡献分布: 此课题设计由周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅及董菁完成; 研究过程由周飞, 卢雅丕, 陈美娅, 施华秀及张波操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由陈建民及刘明提供; 数据分析由施华秀, 张波及董菁完成; 本论文写作由周飞及董菁完成.
通讯作者: 董菁, 361004, 福建省厦门市, 厦门大学医学院附属中山医院消化内科. dj@xmzsh.com
电话: 0592-2293170
收稿日期: 2008-01-17
修回日期: 2008-03-08
接受日期: 2008-05-02
在线出版日期: 2008-05-08
Abstract

目的: 自肝细胞cDNA文库中筛选与HBV主蛋白(SHBs)相互作用的蛋白基因, 探讨主蛋白的生物学功能.

方法: 利用PCR扩增S主蛋白基因, 定向克隆技术将靶基因克隆到pDEST32构建出S主蛋白的诱饵质粒; Western blot方法验证转化诱饵质粒的酵母细胞表达SHBs; 将诱饵质粒与人肝cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞, 在营养缺陷型培养基和X-gal上进行三重筛选阳性菌落, 提取阳性酵母菌落的猎物质粒进行DNA测序; 利用核苷酸数据库及生物信息学技术, 对于筛选结果进行分析.

结果: 构建S主蛋白及肝文库酵母细胞表达载体, 进行酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库, 筛选出既能在缺陷培养基也能在X-gal的检测下变成蓝色的真阳性菌落3个, 分别为核糖体蛋白L3、微管蛋白α-1a和α-2巨球蛋白.

结论: 用酵母双杂交技术筛选出3个与SHBs相互作用的肝细胞结合蛋白编码基因, 提示SHBs可能参与到肝细胞内部的多种生物学反应.

Keywords: 乙型肝炎病毒; 酵母双杂交技术; 主蛋白; 结合蛋白; 聚合酶链式反应