研究快报
Copyright ©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2008-04-28; 16(12): 1350-1354
Published online 2008-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i12.1350
Tec激酶区作用蛋白RAI16的原核表达和纯化
许文, 王阁, 邓婧, 杨进, 郑继军, 王红中, 胡庆, 王东, 李增鹏, 杨志祥
许文, 王阁, 邓婧, 杨进, 郑继军, 王红中, 胡庆, 王东, 李增鹏, 杨志祥, 中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心 重庆市 400042
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30370341, No. 30570410; 全国优秀博士专项基金资助项目, No. 200261.
作者贡献分布: 此课题由王阁, 许文, 邓婧, 杨进, 郑继军, 王红中及杨志祥设计; 研究过程由许文, 邓婧, 杨进, 郑继军, 王红中, 胡庆及杨志祥操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由王阁, 王东及李增鹏提供; 数据分析由许文, 王阁, 郑继军, 王红中, 胡庆及杨志祥完成; 本论文写作由许文, 王阁及邓婧完成.
通讯作者: 王阁, 400042, 重庆市, 中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心. wangge70@hotmail.com
电话: 023-68757796
收稿日期: 2007-11-08
修回日期: 2008-03-14
接受日期: 2008-04-21
在线出版日期: 2008-04-28
Abstract

目的: 利用原核表达系统构建Tec激酶区作用蛋白RAI16的融合蛋白表达载体, 并进行表达条件的优化和初步纯化.

方法: 设计基因拼接引物, 合成RAI16 cDNA序列, 将其连接于克隆载体pMD18-T中; 将酶切、纯化的RAI16基因与pGEX4T-2载体相连接、转化、筛选. 将鉴定阳性的重组子质粒转人大肠杆菌BL-21表达菌中, 采用SDS-PAGE电泳分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白的表达.

结果: 成功构建RAI16蛋白原核表达载体. 采用0.4 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h, 获得较高表达目的蛋白. 融合蛋白主要以包涵体形式表达, 将包涵体进行尿素法变性复性和亲和层析柱处理后, 获得可溶的高纯度GST-多肽融合蛋白.

结论: Tec激酶区作用蛋白RAI16融合蛋白表达的载体和纯化, 是制备RAI16多抗以及进一步验证与Tec体外结合作用实验的基础.

Keywords: Tec蛋白; 视黄酸诱导蛋白16; 核苷酸; 蛋白质结构